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龙图腾网获悉华中农业大学申请的专利一种通过敲除spo11基因创制多倍体鱼类的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118525810B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-18发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202410590581.2，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权一种通过敲除spo11基因创制多倍体鱼类的方法是由曹小娟;黄钰微;高坚;梅熠辉;张运邦;郭艳坤;郑宇轩设计研发完成，并于2024-05-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种通过敲除spo11基因创制多倍体鱼类的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种创制多倍体鱼类的方法，利用CRISPRCas9基因敲除技术对spo11基因进行敲除，通过基因型鉴定和选育获得spo11纯合敲除个体；利用spo11纯合敲除二倍体雌性能够产生部分不减数卵子的特性，可获得三倍体，进而筛选获得spo11纯合敲除三倍体3Nspo11‑‑‑；利用3Nspo11‑‑‑雌性能够产生部分不减数卵子的特性，进而筛选获得杂合敲除四倍体4Nspo11+‑‑‑；利用4Nspo11+‑‑‑能产生大量二倍体配子的特性，进而制备大量的三倍体子代。与其他多倍体育种方法相比，本发明有普适性和遗传可控性，为人工诱导鱼类多倍体提供了重要的技术支持。

本发明授权一种通过敲除spo11基因创制多倍体鱼类的方法在权利要求书中公布了：1.一种通过敲除spo11基因创制多倍体鱼类的方法，其特征在于包括以下步骤： 1利用CRISPRCas9系统对野生型二倍体鱼的spo11基因进行敲除，通过基因型鉴定和选育获得spo11纯合敲除二倍体2Nspo11--和spo11杂合敲除二倍体2Nspo11+-； 2将雌性2Nspo11--与雄性2Nspo11+-交配，获得的子代发育至三月龄时，通过基因型鉴定和流式检测，筛选获得spo11纯合敲除三倍体3Nspo11---； 3将雌性3Nspo11---与野生型二倍体雄性交配，获得的子代发育至三月龄时，通过基因型鉴定和流式检测，筛选获得spo11杂合敲除四倍体4Nspo11+---； 4将4Nspo11+---与野生型二倍体异性交配，繁殖获得大量子代，这些子代即为遗传可控的三倍体鱼， 所述spo11基因的敲除方法包括以下步骤： 1按照CRISPRCas9系统的基因敲除原理，根据spo11基因序列，参考靶点设计原则，在基因外显子区域设计spo11基因敲除靶位点，所述spo11基因敲除靶位点序列如SEQIDNO.1所示； 2设计spo11基因敲除靶位点的上下游引物，所述spo11基因敲除靶位点的上游引物序列如SEQIDNO.4所示，下游引物序列如SEQIDNO.5所示，以野生型二倍体鱼的cDNA为模板进行PCR扩增，进行体外转录、纯化后得到gRNA； 3以线性化Cas9质粒为模版，体外转录、纯化后得到Cas9mRNA； 4对野生型二倍体鱼的受精卵显微注射gRNA和Cas9mRNA，之后将受精卵进行孵化培育，检测胚胎的基因敲除效率，将经检测spo11基因有效敲除的胚胎培育至成年得到F0个体。

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