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龙图腾网获悉中国人民解放军海军军医大学申请的专利免疫磁分离联合底物肽以LC-MS/MS特异性检测门冬酰胺酶活性的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119023960B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-18发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411028344.3，技术领域涉及：G01N33/573；该发明授权免疫磁分离联合底物肽以LC-MS/MS特异性检测门冬酰胺酶活性的方法是由杨文;周婷婷;范志鹏;耿舒文;杨静姝;田甜;江玥曈设计研发完成，并于2024-07-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本免疫磁分离联合底物肽以LC-MS/MS特异性检测门冬酰胺酶活性的方法在说明书摘要公布了：本发明涉及医学检测领域，具体是免疫磁分离联合底物肽以LC‑MSMS特异性检测门冬酰胺酶活性的方法，是以酰胺反应介导偶联门冬酰胺酶抗体制备免疫磁珠为基础，专属分离和富集样品中门冬酰胺酶，以门冬酰胺酶特异性剪切底物肽门冬酰胺为基础，加入门冬酰胺溶液反应后，实现以LC‑MSMS直接高灵敏检测门冬酰胺酶活性。本发明借助磁分离快速专属分离富集样品中的待测门冬酰胺酶，结合门冬酰胺酶作为蛋白酶特异性剪切底物肽门冬酰胺的特性，高效专属剪切门冬酰胺生成大量天冬氨酸，采用质谱进行门冬酰胺酶活性，显著提高检测门冬酰胺酶活性的灵敏度和特异性，操作简便，为推动门冬酰胺酶体内活性水平监测具有重要现实意义。

本发明授权免疫磁分离联合底物肽以LC-MS/MS特异性检测门冬酰胺酶活性的方法在权利要求书中公布了：1.免疫磁分离联合门冬酰胺以LC-MSMS特异性检测门冬酰胺酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤： A采用酰胺反应介导偶联门冬酰胺酶抗体至磁性纳米颗粒表面，制备免疫磁珠；所述免疫磁珠为磁珠与门冬酰胺酶抗体偶联制得的抗体免疫功能化磁珠；所述的抗体免疫功能化磁珠的制备方法包括以下步骤a-f： a以水热法制备四氧化三铁磁性纳米颗粒，随后在磁性纳米颗粒表面原位引入琼脂糖分子层，进一步修饰NHS活化酯基团，制备得NHS磁珠； b移取NHS活化磁性纳米颗粒分散液，磁分离去除上清，快速加入预冷盐酸溶液混匀清洗，磁分离去除上清； c加入门冬酰胺酶单克隆抗体，4℃避光旋转混匀反应12h，磁分离去除上清； d外加磁场条件下，以100mMTris-HCl缓冲液，反复清洗4次，重新分散于100mMTris-HCl中，室温旋转避光封闭2h，磁分离去除上清； e采用含5％BSA的10mMPBS吹打混匀清洗磁珠4次，重新分散于含5％BSA的10mMPBS中，4℃旋转避光封闭12h； f磁分离去除上清，以含0.1％BSA的PBS反复清洗4次后再分散，即得抗体免疫功能化磁珠； B加入不同量的门冬酰胺酶标准品至空白生物样品中配制不同浓度的含门冬酰胺酶样品，分别以免疫磁珠进行特异性的捕获与富集，得到各个样品相应的免疫磁珠门冬酰胺酶复合物；加入门冬酰胺至免疫磁珠门冬酰胺酶复合物中，门冬酰胺酶特异性剪切门冬酰胺形成天冬氨酸与氨气，以LC-MSMS检测样品的上清液，以门冬酰胺酶的浓度为横坐标，质谱检测天冬氨酸信号强度为纵坐标，建立门冬酰胺酶-质谱响应信号的标准曲线； C将待测样品与免疫磁珠混匀孵育后，加入门冬酰胺磷酸缓冲液进行LC-MSMS检测，将所得的天冬氨酸信号强度代入至标准曲线，即可计算得到待测样品中门冬酰胺酶的活性。

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