山东大学侯进获国家专利权
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龙图腾网获悉山东大学申请的专利一种产L-苹果酸的酿酒酵母工程菌株及其构建方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119177174B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410998363.2,技术领域涉及:C12N1/19;该发明授权一种产L-苹果酸的酿酒酵母工程菌株及其构建方法和应用是由侯进;熊贞;祁庆生;郭雅琳;黄明涛设计研发完成,并于2024-07-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种产L-苹果酸的酿酒酵母工程菌株及其构建方法和应用在说明书摘要公布了:本发明属于基因工程领域,尤其涉及一种产L‑苹果酸的酿酒酵母工程菌株及其构建方法和应用。具体的,本发明通过引入rTCA途径,构建了苹果酸的生产菌株,并通过增加前体物质,关键基因多拷贝,调节辅因子供应等代谢工程策略,提高苹果酸的产量,比初始构建的菌株提高了7.2倍。在此基础上,将苹果酸生产菌株与耐酸菌株交配提高了菌株的生产效率,优化副产物积累,在摇瓶中发酵24h能够产生12gL苹果酸,转化率为0.69gg,生产率为0.5gLh,在1L发酵罐中获得65.3gL苹果酸。同时为低pH发酵生产苹果酸奠定了基础。
本发明授权一种产L-苹果酸的酿酒酵母工程菌株及其构建方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种产L-苹果酸的酿酒酵母工程菌株,其特征在于,以酿酒酵母BY-A0为出发菌株,构建苹果酸生产途径、增加前体物质草酰乙酸、多轮整合苹果酸脱氢酶、过表达磷酸烯醇式丙酮酸激酶PCK、敲除苹果酸内运蛋白DIC1后过表达葡萄糖-6-磷酸脱氢酶ZWF1和转氢酶EcSthA获得; 所述构建苹果酸生产途径通过过表达苹果酸脱氢酶、苹果酸转运蛋白MAE1实现; 所述增加前体物质草酰乙酸通过过表达丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC,并敲除甘油-3-磷酸脱氢酶实现; 所述苹果酸脱氢酶为酿酒酵母内源的截短过氧化物酶定位肽的苹果酸脱氢酶ScMDH3ΔSKL,其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示; 所述苹果酸转运蛋白MAE1来自粟酒裂殖酵母的SpMAE1,其GenBank号为CAC37422.1; 所述丙酮酸羧化酶包括PYC1和PYC2,GenBank号分别为CAA96765.1,CAA85182.1; 所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC为大肠杆菌来源的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的突变体PPCK620S,在GenBank:CAD6022922.1所示的氨基酸序列中将K620突变为S; 所述甘油-3-磷酸脱氢酶包括GPD1和GPD2,其GenBank号分别为KAG2509011.1,KAG2511872.1; 所述磷酸烯醇式丙酮酸激酶PCK,其GenBank号为AAC45394.1; 所述苹果酸内运蛋白DIC1,其GenBank号为QHB10491.1; 所述葡萄糖-6-磷酸脱氢酶ZWF1,其GenBank号为CAA96146.1; 所述转氢酶EcSthA,其GenBank号为CAD6022916.1; 所述多轮整合苹果酸脱氢酶将ScMDH3ΔSKL基因的表达盒整合在Delta区实现。
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