新疆农垦科学院郭慧静获国家专利权
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龙图腾网获悉新疆农垦科学院申请的专利香梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白提取及纯化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119569815B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411858223.1,技术领域涉及:C07K1/14;该发明授权香梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白提取及纯化方法是由郭慧静;程少波;李斌斌;贾文婷;杨慧;周樱子;刘战霞;张飞;金新文;宋方圆设计研发完成,并于2024-12-17向国家知识产权局提交的专利申请。
本香梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白提取及纯化方法在说明书摘要公布了:本发明公开了香梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白提取及纯化方法,其包括:步骤一、将香梨破碎,得香梨粉碎物;步骤二、用硫酸铵溶液对过滤后的粉碎物进行沉淀;步骤三、将沉淀用缓冲溶液进行溶解,进行透析初纯化,得粗提物;步骤四、利用凝胶过滤层析柱对粗提物进行纯化,得纯化提取物,干燥后即得。本发明以天然香梨果为原料,不依赖化学合成或基因工程技术,符合绿色、环保和可持续的发展理念;本发明提取与纯化工艺包括过滤、沉淀、溶解、透析及滤膜过滤等多步纯化过程,使用滤纸过滤、离心和透析等常规实验室技术,使得整个过程易于实施和重复,在提高了实验的可行性和可靠性同时,且显著提升了提取物的纯度、生物活性和提取率。
本发明授权香梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白提取及纯化方法在权利要求书中公布了:1.香梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白提取及纯化方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤一、将香梨果去核,用超微粉碎机破碎,得香梨粉碎物; 步骤二、用滤纸将香梨粉碎物进行过滤,收集第一上清液,将第一上清液用硫酸铵溶液进行沉淀,离心去除溶剂,收集沉淀; 步骤三、将沉淀用缓冲溶液进行溶解,离心收集第三上清液,将第三上清液用缓冲液进行透析,随后用0.45um滤膜过滤,得粗提物; 步骤四、利用凝胶过滤层析柱对粗提物进行纯化,得纯化提取物,经冷冻干燥得香梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白; 其中,步骤一中,在用超微粉碎机破碎的过程中,向超微粉碎机中加入稳定剂一并进行破碎操作,所述稳定剂与去核香梨果的重量比为0.01~0.03:1;所述稳定剂包括0.005~0.01份的二硫苏糖醇、0.15~0.25份的聚乙烯基吡咯烷酮、0.3~0.5份的蛋白酶抑制剂;蛋白酶抑制剂为二异丙基氟磷酸或碘乙酸; 步骤二中,将第一上清液用硫酸铵溶液进行沉淀,离心去除溶剂,收集沉淀,具体包括: 步骤201、向第一上清液中加入硫酸铵至饱和度为35%,4℃下静置1~2h,随后在2000~3000rmin下离心,得到第一沉淀和第二上清液A; 步骤202、向第二上清液A中加入硫酸铵至饱和度为55%,4℃下静置1~2h,随后在4000~5500rmin下离心,得到第二沉淀和第二上清液B; 步骤203、向第二上清液B中加入硫酸铵至饱和度为75%,4℃下静置1~2h,随后在5000~6500rmin下离心,得到第三沉淀; 在步骤201、步骤202和步骤203中,在加入硫酸铵之前,向第一上清液第二上清液A第二上清液B中加入0.02~0.05molL的L-抗坏血酸钠和0.03~0.05molL的乙二胺四乙酸二钠; 步骤二中,在用滤纸将香梨粉碎物进行过滤之前,还经过了预处理,向香梨粉碎物置于0℃冰浴下,加入香梨粉碎物5倍重量的丙酮,搅拌均匀后过滤,用三甲基硅醚进行冲洗,即得预处理后的香梨粉碎物,用滤纸将预处理后香梨粉碎物进行过滤。
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