齐鲁工业大学(山东省科学院)苏静获国家专利权
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龙图腾网获悉齐鲁工业大学(山东省科学院)申请的专利一种高癸酸耐受性的基因工程菌及其构建方法与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120005789B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510180459.2,技术领域涉及:C12N1/21;该发明授权一种高癸酸耐受性的基因工程菌及其构建方法与应用是由苏静;赵迪;刘艺涵;朱会迎;刘犇;王瑞明;汪俊卿;李丕武;王婷设计研发完成,并于2025-02-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种高癸酸耐受性的基因工程菌及其构建方法与应用在说明书摘要公布了:本发明涉及一种高癸酸耐受性的基因工程菌及其构建方法与应用。所述基因工程菌以大肠杆菌为出发菌株,敲除aaS基因,同时过表达mlaZ基因和mlaY基因;其中,aaS基因核苷酸序列的GeneID为947315;mlaZ基因核苷酸序列的GeneID为882402;mlaY基因核苷酸序列的GeneID为882401。本发明通过敲除大肠杆菌中的aaS基因以及同时过表达mlaZ和mlaY基因,有效加强了大肠杆菌工程菌的膜脂强度,使得基因工程菌在高浓度底物癸酸的发酵过程中表现出更好的鲁棒性和更高的耐受性。在癸酸流加至最高浓度3.0gL时,反式‑2‑癸烯酸的产量可达1.47gL,转化率为49.13%,显著提高了产量。
本发明授权一种高癸酸耐受性的基因工程菌及其构建方法与应用在权利要求书中公布了:1.一种高癸酸耐受性的基因工程菌E.coli-△BRJA-SKA,其特征在于,所述基因工程菌E.coli-△BRJA-SKA以大肠杆菌为出发菌株,敲除aaS基因,同时过表达mlaZ基因和mlaY基因; 其中,所述aaS基因核苷酸序列的GeneID为947315;所述mlaZ基因核苷酸序列的GeneID为882402;所述mlaY基因核苷酸序列的GeneID为882401; 所述出发菌株为大肠杆菌工程菌BL21DE3-△fadB-△fadR-△fadJ; 所述高癸酸耐受性的基因工程菌E.coli-△BRJA-SKA的构建方法,包括步骤如下: 1利用CRISPRCas9技术对大肠杆菌工程菌BL21DE3-△fadB-△fadR-△fadJ中的aaS基因进行基因敲除,敲除完成后进行质粒消除,得到大肠杆菌工程菌BL21DE3-△fadB-△fadR-△fadJ-ΔaaS; 2人工合成mlaY基因的核苷酸序列、mlaZ基因的核苷酸序列和pelb信号肽的核苷酸序列;然后以pelb信号肽和mlaY基因的混合物为模板,以pelb-mlaY-FR为引物进行PCR扩增,得到pelb-mlaY序列;以pelb信号肽和mlaZ基因的混合物为模板,以pelb-mlaZ-FR为引物进行PCR扩增,得到pelb-mlaZ序列;将质粒载体pET22b、pelb-mlaY序列和pelb-mlaZ序列双酶切后连接至一起,得到质粒pET22b-pelb-mlaY-pelb-mlaZ; 3构建质粒pET28a-sumo-CtydiI和质粒pCDFDuet-1-MaMACS-PpfadE; 4将质粒pET28a-sumo-CtydiI、质粒pCDFDuet-1-MaMACS-PpfadE和质粒pET22b-pelb-mlaY-pelb-mlaZ共转化至大肠杆菌工程菌BL21DE3-△fadB-△fadR-△fadJ-ΔaaS感受态中,使用含有卡那霉素、氨苄青霉素、链霉素的培养基筛选阳性重组子,得到高癸酸耐受性的基因工程菌E.coli-△BRJA-SKA。
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