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龙图腾网获悉海南大学三亚南繁研究院申请的专利一种农杆菌介导的油棕遗传转化方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119662723B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-11-28发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411725550.X，技术领域涉及：C12N15/84；该发明授权一种农杆菌介导的油棕遗传转化方法是由李东栋;欧阳超;邹积鑫设计研发完成，并于2024-11-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种农杆菌介导的油棕遗传转化方法在说明书摘要公布了：本发明提供了一种农杆菌介导的油棕遗传转化方法，以油棕胚性愈伤组织为外植体，采用农杆菌介导方式，在转化过程中筛选使用最适用于油棕遗传转化的农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度及抗生素浓度，并利用包含EPSPS突变基因的表达盒作为筛选标记，以草甘膦作为筛选剂进行筛选，成功获得草甘膦抗性愈伤组织。本发明筛选效率超过了传统的hpt潮霉素筛选系统。同时也证明了EPSPS草甘膦筛选系统在油棕遗传转化中的有效性，标志着其首次应用于油棕的遗传转化，为推进这一重要经济作物的研究提供了有价值的工具。

本发明授权一种农杆菌介导的油棕遗传转化方法在权利要求书中公布了：1.一种农杆菌介导的油棕胚性愈伤遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤： 1愈伤组织的继代： 挑选淡黄色、颗粒状、干燥、活力强的愈伤组织置于继代增殖培养基中，经继代培养进行扩繁； 继代增殖培养基的组成为：MS培养基中添加0.05gL抗坏血酸、30gL蔗糖、100mlL椰子水、6gL琼脂和0.5gL活性炭； 2愈伤预培养 挑选淡黄色、颗粒状、干燥、活力强的愈伤组织，切分成8～12mm小块转入预培养基中，黑暗条件下预培养3-4d； 预培养基的组成为：MS培养基中添加0.05gL抗坏血酸、30gL蔗糖、100mlL椰子水、100μM~300μM乙酰丁香酮、50~200mgL半胱氨酸； 3农杆菌侵染液制备 将含EPSPS突变基因的筛选表达盒的重组质粒的农杆菌进行划线涂板，孵育扩繁；将扩繁的农杆菌刮入含有100μM~300μM浓度范围的乙酰丁香酮的MS0液体培养基中，悬浮菌体，震荡20min~1h，将菌体溶液密度OD600值调至0.5~0.7，用于浸染； MS0液体培养基的组成为：MS培养基中添加0.05gL抗坏血酸、30gL蔗糖、100mlL椰子水； 所述含EPSPS突变基因的筛选表达盒的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示； 所述的农杆菌为根癌农杆菌AgrobacteriumtumefaciensEHA105或LBA4404或GV3101； 4浸染 将生长状态良好的野生型胚性愈伤组织置于农杆菌侵染液中侵染30min~1h； 5共培养 将浸染后的胚性愈伤组织移至共培养基，在19℃-22℃的培养箱共培养72h；所述的共培养基与步骤2所述的预培养基组份一样； 6脱菌清洗 共培养后，用无菌水清洗，直至无菌水呈澄清的状态；配制含有抑菌抗生素的溶液，将胚性愈伤组织移至溶液中，置于摇床震荡；将液体倒干净后，将愈伤组织平铺在无菌滤纸上，工作台中吹2-3h，翻晾至吹干； 所述的抑菌抗生素的溶液为500mgL头孢噻污钠溶液或500mgL特美汀溶液； 7抗性愈伤组织的筛选 配制含筛选剂的油棕胚性愈伤筛选培养基，将脱菌清洗晾干的胚性愈伤组织转到筛选培养基中，每皿放9-15粒愈伤；定期更换新的筛选培养基，筛选培养4-5次获得抗性愈伤； 所述的筛选培养基为：MS培养基中添加0.05gL抗坏血酸、30gL蔗糖、100mlL椰子水、500mgL特美汀溶液、3~5mM草甘膦。

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