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龙图腾网获悉华东师范大学申请的专利一种抗原特异性T细胞原位检测方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120294326B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-05发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510284113.7，技术领域涉及：C07K14/705；该发明授权一种抗原特异性T细胞原位检测方法及应用是由裴昊;杨涵;李丽;孙越洋设计研发完成，并于2025-03-11向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种抗原特异性T细胞原位检测方法及应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种抗原特异性T细胞原位检测方法及应用，通过在DNA折纸支架上对pMHC单体肽‑MHC复合物进行纳米级空间组织，显著提高了pMHC的价态，从而实现了与组织切片中低亲和力T细胞的稳定结合。同时，利用DNA折纸的精确寻址能力以及信号捕捉链的设计，大幅提升了检测信号的放大效率。此外，通过引物交换反应PER反应生成具有重复引物序列引物1和引物2的单链DNA产物，在DNA折纸支架上形成树枝状结构以结合多个荧光基团，从而实现了抗体非依赖的高荧光强度原位检测，简化了实验流程并降低了检测成本。

本发明授权一种抗原特异性T细胞原位检测方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种基于引物交换反应和DNA折纸的可编程pMHC多聚体P-DOS-pMHCs的抗原特异性T细胞原位检测方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、待测组织样本进行预处理； S2、将基于引物交换反应和DNA折纸的可编程pMHC多聚体P-DOS-pMHCs与步骤S1预处理后的组织样本反应一段时间后，对组织样本进行固定、淬灭和洗涤； S3、在步骤S2处理后的组织样本中加入偶联了荧光基团的短单链DNA并反应；偶联了荧光基团的短单链DNA为偶联了AF488的DNA短链，其序列如SEQIDNO.21所示； S4、步骤S3处理后的组织样本进行染色和封片，进行成像和分析； S2中，所述P-DOS-pMHCs由包括如下步骤的方法制备获得： S21、通过PER反应生成包含重复引物序列的单链DNA产物，以及，构建生物素化DNA折纸； S21中、通过PER反应生成包含重复引物序列的单链DNA产物的步骤包括如下步骤： a、配置含有以下组分的反应体系： 10ul10xPBS； 终浓度为10mMMgSO4； 400-1000UmlBstDNA聚合酶； 600uMdATP，600uMdCTP，600uMdTTP； 100nMClean-GHairpinDNA，所述Clean-GHairpin的序列如SEQIDNO.17所示； 0.5uMHairpin1和0.3uMHairpin2；所述Hairpin1的序列如SEQIDNO.14所示；所述Hairpin2的序列如SEQIDNO.16所示； 用双蒸水补充至90ul； b、进行孵育与引物添加，包括： 在37℃孵育15分钟，加入10ul10uM的引物1或引物2，继续在37℃孵育1-3小时，然后升温至80℃保持20分钟，即得；所述引物1的序列如SEQIDNO.13所示，所述引物2的序列如SEQIDNO.15所示； S21中、所述生物素化DNA折纸为链霉亲和素SA标记的生物素化DNA折纸； 所述链霉亲和素SA标记的生物素化DNA折纸的制备方法包括如下步骤： 将M13mp18DNA和组成框架结构的若干个DNA链混合，形成反应体系；对反应体系进行热循环处理；并梯度降温至室温；使用分子量截断值为50-200kDa的超滤器进行纯化，纯化产物与链霉亲和素SA在室温下共孵育，获得SA标记的生物素化DNA折纸； S22、将链霉亲和素SA标记的生物素化DNA折纸和包含重复引物序列的单链DNA产物共同孵育，制得基于PER反应的DNA折纸；具体如下： 链霉亲和素SA标记的生物素化DNA折纸和包含重复引物序列的单链DNA产物共同孵育，通过碱基互补杂交在DNA折纸表面形成含重复序列的树枝状结构；其中，引物1和Hairpin1生成的单链DNA产物记为长单链DNA-1；引物2和Hairpin2生成的单链DNA产物记为长单链DNA-2；SA标记的生物素化DNA折纸通过预设的overhang序列与长单链DNA-1、DNA-2依次杂交，在DNA折纸表面形成含重复序列的树枝状结构； S23、将生物素化pMHC单体和基于PER反应的DNA折纸共同孵育，制得P-DOS-pMHCs；所述生物素化pMHC单体包括H-2Kbamp;B2Mamp;OVA或H-2Kdamp;B2Mamp;InsB。

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