上海市口腔医院(上海市口腔健康中心)刘月华获国家专利权
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龙图腾网获悉上海市口腔医院(上海市口腔健康中心)申请的专利一种血管化肌肉模型及其制备与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN114990050B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210646594.8,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权一种血管化肌肉模型及其制备与应用是由刘月华;李娇;刘婷姣设计研发完成,并于2022-06-08向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种血管化肌肉模型及其制备与应用在说明书摘要公布了:本发明涉及肌肉芯片技术领域,尤其是涉及一种血管化肌肉模型及其制备与应用。本发明首先将成肌细胞、内皮细胞、细胞培养液和细胞外基质的替代物混匀得到混悬液;然后将混悬液置于预处理的肌肉芯片中诱导分化得到血管化肌肉模型。本发明实现将肌肉和血管在芯片中共培养,更加仿生肌肉微环境,使得形成的组织无论从形态结构到关键生理功能均与体内更相似,可以更有效的应用于肌肉损伤相关疾病的基础研究和临床药物筛选中,使所获得的研究结果更准确可靠。本发明制备得到的血管化肌肉模型可以广泛应用于肌肉相关疾病的基础研究和药物评价体系。
本发明授权一种血管化肌肉模型及其制备与应用在权利要求书中公布了:1.一种血管化肌肉模型的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: 1将成肌细胞、内皮细胞、细胞培养液和细胞外基质的替代物混匀得到混悬液; 所述细胞培养液为体积分数为10%FBS和1%ECGS的培养基; 所述细胞外基质的替代物包括Matrigel胶、fibrinogen、凝血酶和抑肽酶; 成肌细胞和内皮细胞、细胞培养液、Matrigel胶、fibrinogen、凝血酶和抑肽酶的用量比为7.5×105个:16-18μL:10μL:10μg:0.05U:0.08μg; 成肌细胞、内皮细胞的个数比为3-6:1; 2将步骤1制备得到的混悬液置于预处理的肌肉芯片中,并放置于37℃、5%CO2的细胞培养箱内1小时,待Matrigel胶凝固后,加入体积比为1:1的DMEM细胞培养基和ECM培养基进行3D细胞培养,待3D细胞培养3天稳定后,更换含有2%马血清的培养基进行诱导分化,得到血管化肌肉模型; 所述预处理为将肌肉芯片浸入体积分数为0.2%-2%PluronicF-127中以防止细胞粘附,静置后吸干;所述的DMEM细胞培养基包含体积浓度为10%FBS和1%双抗,所述ECM培养基中包含体积浓度为5%FBS、1%ECGS和1%双抗;所述的2%马血清的培养基包含体积浓度为96%DMEM、1%ECGS和1%双抗;诱导分化过程中,诱导分化时间为7-14天; 肌肉芯片通过下述方法制备得到: 在聚四氟乙烯板表面制备两个平行的哑铃状通道,所述哑铃状通道包括连接通道以及连接通道两侧的端部通道,形成阳模;两个哑铃状通道的长度、宽度和深度均相同;连接通道长度为7mm,宽度为2mm,深度为1.5mm;端部通道垂直于连接通道的长度为4mm,平行于连接通道的长度为2mm,深度为1.5mm;相邻哑铃状通道之间的距离为4mm; 将PDMS灌注于阳模上,并放于4℃冰箱内静置过夜,排除PDMS中的气泡,次日将其取出放入烘箱内80℃烘烤1小时,PDMS凝固,放置室温冷却后,揭膜,得到即阴模; 利用硅胶材料制备硅胶框架,硅胶框架的外边宽度为12mm,长度为11mm;内边宽度为10mm,长度为7mm; 将硅胶框架置于阴模有哑铃状凹槽的一侧,通过3号无菌细针头穿插连接起来放置于细胞培养小皿或者孔板内,无需封接,并置于紫外灯下消毒1小时以上,得到肌肉芯片。
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