深圳市易基因科技有限公司王君文获国家专利权
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龙图腾网获悉深圳市易基因科技有限公司申请的专利一种微量游离DNA甲基化建库方法、试剂盒及测序方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN114717662B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-19发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210418242.7,技术领域涉及:C40B50/06;该发明授权一种微量游离DNA甲基化建库方法、试剂盒及测序方法是由王君文;胡琪设计研发完成,并于2022-04-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种微量游离DNA甲基化建库方法、试剂盒及测序方法在说明书摘要公布了:本发明涉及基因检测技术领域,具体而言,涉及一种微量游离DNA甲基化建库方法、试剂盒及测序方法。该建库方法包括以下步骤:提取并分离游离DNA样本;对游离DNA样本进行双末端酶切修剪;在游离DNA片段的5’端连接含有甲基化和生物素修饰的接头序列;对连接接头序列的游离DNA片段进行磁珠捕获和纯化;采用亚硫酸盐转化液对进行亚硫酸盐转化;对亚硫酸盐转化后的游离DNA片段进行二链延伸并进行PCR扩增,得到DNA甲基化文库。该方法能够显著增加游离DNA的CG检测位点数量,对于CG位点的覆盖效果显著。相比于全基因组cfDNA甲基化测序,测序深度显著增加,测序数据量更低,成本更低。
本发明授权一种微量游离DNA甲基化建库方法、试剂盒及测序方法在权利要求书中公布了:1.一种微量游离DNA甲基化建库方法,其特征在于,包括以下步骤: 1提取并分离游离DNA样本; 2对所述游离DNA样本进行双末端酶切修剪,得到游离DNA片段; 3在所述游离DNA片段的5’端连接含有甲基化修饰的接头序列Ad1,在所述游离DNA片段的3’端连接含有生物素修饰的接头序列Ad2; 接头序列Ad1和接头序列Ad2为基于Illumina平台设计的序列;其中,Ad1的核苷酸序列如SEQIDNO1.所示,Ad2的核苷酸序列如SEQIDNO2.所示;或,Ad1的核苷酸序列如SEQIDNO3.所示,Ad2的核苷酸序列如SEQIDNO4.所示; 或,接头序列Ad1和接头序列Ad2为基于MGI平台设计的序列;其中,Ad1的核苷酸序列如SEQIDNO5.所示,Ad2的核苷酸序列如SEQIDNO6.所示;或,中Ad1的核苷酸序列如SEQIDNO7.所示,Ad2的核苷酸序列如SEQIDNO8.所示; 4采用磁珠对连接接头序列的所述游离DNA片段进行捕获和纯化,并得到产物; 5采用亚硫酸盐转化液对步骤4得到的产物进行亚硫酸盐转化; 6对亚硫酸盐转化后的产物进行二链延伸; 7对二链延伸的产物进行PCR扩增,得到DNA甲基化文库。
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