天津大学柳鹏飞获国家专利权
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龙图腾网获悉天津大学申请的专利一种基于无衍射艾里光束的肝内血管三维成像方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120052824B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-12-23发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510257026.2,技术领域涉及:A61B5/00;该发明授权一种基于无衍射艾里光束的肝内血管三维成像方法是由柳鹏飞;李莎莎;敖思雨;赵蓉;李世博;王燕妮;王启仲;张晓东;马慧珍设计研发完成,并于2025-03-05向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于无衍射艾里光束的肝内血管三维成像方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于无衍射艾里光束的肝内血管三维成像方法,属于肝内血管三维成像技术领域,解决了现有检测方法精确性和检测敏感性不足的问题,方法包括通过肝移植或活检手术获取肝脏组织,肝脏组织利用4%PFA固定处理,肝脏组织采用H2O2溶液进行漂白,采用FLASH溶液对肝脏组织进行抗原修复,利用山羊血清封闭液对抗原修复后的肝脏组织封闭处理;对肝脏组织免疫染色处理,肝脏组织脱水处理,基于无衍射艾里光束和高通量显微镜对处理后的肝脏组织拍摄成像,得到肝脏组织的三维成像图片;本发明通过对肝脏组织进行免疫荧光染色及透明化处理,使激光能够顺利穿透组织进行三维成像,能够实现单次大范围图像捕获。
本发明授权一种基于无衍射艾里光束的肝内血管三维成像方法在权利要求书中公布了:1.一种基于无衍射艾里光束的肝内血管三维成像方法,其特征在于,所述基于无衍射艾里光束的肝内血管三维成像方法包括: S10,将肝脏组织利用4%PFA固定,肝脏组织大小修剪为2×2×5mm3,利用PBS洗涤肝脏组织; S20,肝脏组织采用H2O2溶液进行漂白,PBS洗涤; S30,采用FLASH溶液对肝脏组织进行抗原修复,修复完毕后,采用PBT溶液洗涤; S40,利用山羊血清封闭液对抗原修复后的肝脏组织封闭处理; S50,对肝脏组织免疫染色处理,其中,免疫染色时,肝脏组织采用一抗10℃孵育,洗涤后采用二抗同等条件孵育,其中,一抗为血管标记物CD31,二抗为连接金团簇荧光标记的抗兔IgGHamp;L抗体; S60,肝脏组织脱水处理,肝脏组织利用梯度浓度四氢呋喃溶液脱水、二氯甲烷脱脂使样本接近透明,并利用二苄醚匹配折射率; S70,基于无衍射艾里光束和高通量显微镜对处理后的肝脏组织拍摄成像,得到肝脏组织的三维成像图片; 所述对肝脏组织免疫染色处理时,一抗使用兔抗人CD31抗体,一抗稀释比例为1:100或1:200,二抗为山羊抗兔IgGHamp;L,连接有金团簇荧光基团,稀释比例为1:200,一抗和二抗均使用新制备的封闭液稀释,并在10℃摇床上孵育3-4天,孵育后,用PBST洗涤标本; 所述肝脏组织脱水处理的方法,包括: S601,通过四氢呋喃的浓度梯度对肝脏组织进行脱水,每次浸泡脱水1.5小时,四氢呋喃的浓度梯度分别为50%、70%、80%和100%的四氢呋喃溶液; S602,将肝脏组织浸泡在100%的二氯甲烷溶液中1.5小时以脱脂; S603,将组织浸泡在100%的二苄醚溶液中1.5小时,保存温度为4℃。
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