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龙图腾网获悉中国人民解放军空军军医大学申请的专利一种基于VSV载体的HTNV疫苗及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN113842454B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202111161972.5，技术领域涉及：A61K39/12；该发明授权一种基于VSV载体的HTNV疫苗及其制备方法和应用是由张芳琳;叶伟;张惠;程林峰;刘赫;雷迎峰;张亮;党亚美;徐志凯;柏银兰设计研发完成，并于2021-09-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于VSV载体的HTNV疫苗及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明涉及疫苗制备技术领域，具体公开了一种基于VSV载体的HTNV疫苗及其制备方法和应用，通过将HTNV包膜糖蛋白的核苷酸序列插入到重组VSV载体质粒上构建重组质粒后，再进行包装、加工获得的具有免疫原性的HTNV重组VSV疫苗。本发明制备的HTNV疫苗为肾综合征出血热的防治提供新型候选疫苗。

本发明授权一种基于VSV载体的HTNV疫苗及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种基于VSV载体的HTNV疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： S1，pCAGGS-HTNVMI532K质粒的构建： 以质粒pUC-optiGPC为模板，设计突变引物optiGPC-F-infu、GPC-R-infu、optiGPC-I532Kseg1-R和optiGPC-I532Kseg2-F，将532位异亮氨酸点突变为赖氨酸，获得pCAGGS-HTNVMI532K质粒；分别以optiGPC-F-infu、optiGPC-I532Kseg1-R；optiGPC-I532Kseg2-F、optiGPC-R-infu为引物PCR扩增I532Kseg1和I532Kseg2，然后与经EcoRI和KpnI双酶切后的pCAGGS-X-myc载体连接，构建获得单突变质粒pCAGGS-HTNVMI532K； 所述质粒pUC-optiGPC中optiGPC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示； 所述引物optiGPC-F-infu基因序列如SEQIDNO.2所示； 所述引物GPC-R-infu基因序列如SEQIDNO.3所示； 所述引物optiGPC-I532Kseg1-R基因序列如SEQIDNO.4所示； 所述引物optiGPC-I532Kseg2-F基因序列如SEQIDNO.5所示； 所述点突变过程为：先扩增得到扩增I532Kseg1和I532Kseg2，然后与双酶切后的pCASSG载体连接，构建HTNVGPC单突变体pCAGGS-HTNVMI532K，然后将连接产物转化DH5α感受态细菌，双酶切验证，获得pCAGGS-HTNVMI532K质粒； I532Kseg1和I532Kseg2与pCASSG载体连接体系为：pCAGGS载体50ng，I532Kseg136ng，I532Kseg232ng，5×In-FusionEnzymePremix0.8µL，加余量ddH2O使得总体积为30µL； S2，pCAGGS-HTNVMI532KS1094L质粒的构建： 以pCAGGS-HTNVMI532K质粒为模板，设计optiGPC-S1094Lseg1-R引物和optiGPC-S1094Lseg2-F引物，将1094位点丝氨酸处点突变为亮氨酸，获得pCAGGS-HTNVMI532KS1094L质粒；分别以optiGPC-F-infu、optiGPC-S1094Lseg1-R；optiGPC-S1094Lseg2-F、optiGPC-R-infu为引物PCR扩增I532KS1094Lseg1和I532KS1094Lseg2，然后与经EcoRI和KpnI双酶切后的pCAGGS-X-myc载体连接，构建获得双突变质粒pCAGGS-HTNVMI532KS1094L； 所述optiGPC-S1094Lseg1-R引物的基因序列如SEQIDNO.6所示，所述optiGPC-S1094Lseg2-F引物的基因序列如SEQIDNO.7所示； S3，重组质粒rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP的构建： 以pCAGGS-HTNVMI532KS1094L质粒为模板，设计引物rVSV-SphI-M-F和SphI-GPC-C6-R引物，扩增目的片段HTNVMI532KS1094LΔC6，然后与经SphI单酶切后的质粒pVSVΔG-GFP连接，连接产物转化Stbl3感受态细胞，培养提取质粒，获得重组质粒rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP； 所述rVSV-SphI-M-F引物的基因序列如SEQIDNO.8所示，所述SphI-GPC-C6-R引物的基因序列如SEQIDNO.9所示； S4，rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP疫苗的的制备： BHK-21细胞培养至细胞汇合度约90%时，VV-T7以MOI=5感染BHK-212h，转染rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP质粒及辅助质粒pBS-N、pBS-P、pBS-G和pBS-L，制备得到rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP疫苗； 所述rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP质粒和VSV辅助质粒pBS-N、pBS-P、pBS-G、pBS-L的用量比为5:3:5:8:1。

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