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龙图腾网获悉基纳生物技术有限公司申请的专利用于次要等位基因和多态性的鉴定和定量的多重化方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114540470B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210143725.0，技术领域涉及：C12Q1/6858；该发明授权用于次要等位基因和多态性的鉴定和定量的多重化方法是由A·O·H·尼格伦设计研发完成，并于2016-04-22向国家知识产权局提交的专利申请。

本用于次要等位基因和多态性的鉴定和定量的多重化方法在说明书摘要公布了：本申请涉及用于次要等位基因和多态性的鉴定和定量的多重化方法。本文提供了用于检测含有次要核酸物质和一种或多种主要核酸物质的混合物的样品中次要核酸物质是否存在的产品和方法，其中次要核酸物质的量频率或拷贝数小于主要核酸物质的量。某些方法包括扩增混合物并用链终止剂和与扩增子特异性杂交的延伸引物延伸所得的扩增子，其中针对主要核酸物质特异性的链终止剂具有小于对于次要核酸物质特异性的链终止剂的浓度。使链终止剂的浓度倾向于相对于主要核酸物质特异性链终止剂有利于对于次要核酸物质特异性的链终止剂的高浓度改善了检测在混合物中以低频率或拷贝数存在的次要核酸物质的检测限灵敏度。另外，从主要核酸物质扩增子的延伸产物生成的信号可用作阳性对照并且允许相对于混合物中的主要核酸物质对次要核酸物质进行定量。

本发明授权用于次要等位基因和多态性的鉴定和定量的多重化方法在权利要求书中公布了：1.一种用于鉴定包含一种或多种靶核酸的核酸样品中一种或多种次要核酸物质的存在或不存在的多重化方法，所述方法包括： a同时扩增所述核酸样品的靶核酸，其中每种靶核酸具有主要核酸物质和一种或多种次要核酸物质，其中每种次要核酸物质是主要核酸物质的较低频率或拷贝数变体，并且扩增条件包括水、基因组DNA或次要核酸物质和主要核酸物质的混合物、缓冲液、dNTP、引物对、MgCl2和聚合酶，其中MgCl2的浓度与dNTP中每一种的浓度之比选自≤10:1、≤9:1、≤8:1、≤7:1、≤6:1或≤5:1； b在包括对一种或多种主要核酸物质特异的链终止剂和对一种或多种次要核酸物质特异的链终止剂的延伸条件下使a的扩增的核酸与一种或多种延伸引物接触，其中： i一种或多种主要核酸物质共有对主要核酸物质特异且对次要核酸物质非特异的共同链终止剂， ii一种或多种次要核酸物质中的每一种具有对于次要核酸物质特异并且对于主要核酸物质非特异的链终止剂，其中对于次要核酸物质特异的链终止剂：A对于扩增的核酸中的特定次要核酸物质是独特的，并且不被扩增的核酸中的其他次要核酸物质所共有，或B一种或多种次要核酸物质中的至少一种与扩增的核酸中的至少一种其他次要核酸物质共有共同的链终止剂，和 iii对主要核酸物质特异的链终止剂的浓度小于对一种或多种次要核酸物质特异的链终止剂中每一种的浓度， 由此引物延伸到次要核酸物质中相对于主要核酸物质不同的核苷酸位置或通过该位置，从而产生分别对应于次要核酸物质和主要核酸物质的链终止的延伸产物，其存在于样品中；和 c分析b的延伸产物，从而鉴定一种或多种次要核酸物质的存在或不存在， 其中以主要核酸物质的拷贝数或频率的0.25％至小于10％，或0.5％至小于10％，或1％至小于10％的拷贝数或频率存在次要核酸物质，或一种或多种次要核酸物质为主要核酸物质的小于30％，20％，15％，10％，8％，5％，4％，3％，2％，1％，0.8%，0.75%或0.5%，和 其中对主要核酸物质特异的链终止剂的浓度为对次要核酸物质特异的链终止剂中每一种的浓度的1%至20%，或0.1%至10%，或0.01%至5%。

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