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龙图腾网获悉南京启真基因工程有限公司申请的专利一种构建AF双基因突变的动脉粥样硬化模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115247186B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202110749143.2，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权一种构建AF双基因突变的动脉粥样硬化模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用是由牛冬;汪滔;刘璐;马翔;陶裴裴;曾为俊;王磊;程锐;赵泽英;黄彩云;段星设计研发完成，并于2021-07-01向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种构建AF双基因突变的动脉粥样硬化模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种构建AF双基因突变的动脉粥样硬化模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了的包括质粒pKG‑U6gRNAAPOE‑E2‑gRNA2、靶序列结合区如SEQIDNO：25中第3‑22位核苷酸所示的FBN1‑gRNA4、靶序列结合区如SEQIDNO：26中第3‑22位核苷酸所示的FBN1‑gRNA6和SEQIDNO：27所示的FBN1‑mutant‑ss163。所述试剂盒的用途：制备重组细胞；制备动脉粥样硬化模型猪；制备动脉粥样硬化细胞模型或动脉粥样硬化组织模型或动脉粥样硬化器官模型。质粒pKG‑U6gRNAAPOE‑E2‑gRNA2，其转录得到靶序列结合区如SEQIDNO：11中第1‑20位核苷酸所示的sgRNAAPOE‑E2‑gRNA2APOE‑E2‑gRNA2。本发明为通过体细胞核移植动物克隆技术培育动脉粥样硬化疾病模型猪奠定了基础。

本发明授权一种构建AF双基因突变的动脉粥样硬化模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在权利要求书中公布了：1.一种试剂盒，包括质粒pKG-U6gRNAAPOE-E2-gRNA2、表达Cas9蛋白的质粒、FBN1-gRNA4、FBN1-gRNA6、FBN1-mutant-ss163和NCN蛋白； 质粒pKG-U6gRNAAPOE-E2-gRNA2，其转录得到sgRNAAPOE-E2-gRNA2；sgRNAAPOE-E2-gRNA2，为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：11中第1-20位核苷酸所示； 表达Cas9蛋白的质粒如SEQIDNO：29所示； FBN1-gRNA4，为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：25中第3-22位核苷酸所示； FBN1-gRNA6，为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：26中第3-22位核苷酸所示； FBN1-mutant-ss163为SEQIDNO：27所示的单链DNA分子； 所述NCN蛋白如SEQIDNO：3所示； 所述NCN蛋白的制备方法包括如下步骤： 1将质粒pKG-GE4导入大肠杆菌BL21DE3，得到重组菌； 2采用液体培养基30℃培养所述重组菌，然后加入IPTG并25℃诱导培养，然后收集菌体； 3将收集的菌体进行菌体破碎，收集粗蛋白溶液； 4采用亲和层析从所述粗蛋白溶液中纯化具有His6标签的融合蛋白； 5采用具有His6标签的肠激酶酶切具有His6标签的融合蛋白，然后采用Ni-NTA树脂去除具有His6标签的蛋白，得到纯化的NCN蛋白； 质粒pKG-GE4如SEQIDNO：1所示； 所述试剂盒的用途为如下a或b或c：a制备重组细胞；b制备动脉粥样硬化模型猪；c制备动脉粥样硬化细胞模型或动脉粥样硬化组织模型或动脉粥样硬化器官模型。

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