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龙图腾网获悉南京工业大学申请的专利一种双顺反子翻译偶联表达载体及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115786377B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210876273.7，技术领域涉及：C12N15/70；该发明授权一种双顺反子翻译偶联表达载体及其应用是由李莎;王鑫沂;徐虹;王瑞;罗正山;邱益彬设计研发完成，并于2022-07-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种双顺反子翻译偶联表达载体及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种双顺反子翻译偶联表达载体，所述表达载体在pET‑28a+质粒上插入分子伴侣、新的核糖体结合位点和目的蛋白基因，构建成双顺反子翻译偶联表达载体。进一步地，本发明构建了基因工程菌，其为以E.coliBL21DE3为表达宿主，利用双顺反子翻译偶联表达载体，实现贻贝蛋白Mgfp‑3B与分子伴侣SUMO和或TrxA的共表达，促进Mgfp‑3B正确折叠翻译从而以可溶性形式表达。本发明实现了在大肠杆菌中简便快捷地生产具有生物活性的可溶性贻贝蛋白，并且双顺反子表达载体避免了融合表达造成的酶切分子伴侣操作。此外本发明通过优化的发酵培养基与发酵工艺，使可溶性贻贝蛋白产量达到200‑300mgL，简化了下游纯化工艺。

本发明授权一种双顺反子翻译偶联表达载体及其应用在权利要求书中公布了：1.一种双顺反子翻译偶联表达载体，其特征在于，所述表达载体在pET-28a+质粒上插入分子伴侣、新的核糖体结合位点和目的蛋白基因，构建成双顺反子翻译偶联表达载体，其中，分子伴侣基因位于插入的新的核糖体结合位点上游，目的蛋白基因位于插入的新的核糖体结合位点下游，所述目的蛋白基因为贻贝蛋白基因，所述分子伴侣为SMUO和TrxA的组合；所述贻贝蛋白基因为Mgfp-3B，其核苷酸序列如SEQIDNo：1所示；编码基因SUMO的核苷酸序列如SEQIDNo：3所示，其氨基酸序列如SEQIDNo：4所示；编码基因TrxA的核苷酸序列如SEQIDNo：5所示，其氨基酸序列如SEQIDNo：6所示；其中，所述双顺反子翻译偶联表达载体的构建方法包括如下步骤： 1对贻贝蛋白基因、分子伴侣SUMO-TrxA基因编码区的克隆，其中在分子伴侣的下游引物和贻贝蛋白的上游引物均引入一个额外的核糖体结合位点： 根据Mgfp-3B的编码区序列设计上下游引物，上游自起始密码子处设计，下游引物至终止密码子处设计，其中上游引物中引入新的核糖体结合位点设计的引物为： 上游引物3B-F2:5’-CTGGCCGGTAAGGAGGGCTAATGAACAACATCAGCGTTGC-3’； 下游引物3B-R:5’-TGGTGGTGGTGGTGCTCGAGATAGTTATATTTACGACGAC-3’； PCR产物经1％琼脂糖凝胶，切胶回收Mgfp-3B基因片段； 根据TrxA的编码区序列设计上下游引物，上游自起始密码子处设计，下游引物至终止密码子处设计，其中下游引物中引入新的核糖体结合位点；设计的引物为： 上游引物TrxA-F2:5’-ATCGTGAACAGATTGGTGGTATGAGCGATAAAATCATCCA-3’； 下游引物TrxA-R:5’-GTTCATTAGCCCTCCTTACCGGCCAGATTGGCATCCAGAA-3’； PCR产物经1％琼脂糖凝胶，切胶回收TrxA的基因片段； TrxA与Mgfp-3B的基因片段通过PCR进行连接，PCR产物经1％琼脂糖凝胶，切胶回收得到TrxA-Mgfp-3B基因片段； 根据SUMO的编码区序列设计上下游引物，上游自起始密码子处设计，下游引物至终止密码子处设计，设计的引物为： 上游引物SUMO-F:5’-GAAGGAGATATACCATGGGCATGAGCGATAGTGAAGTTAA-3’； 下游引物SUMO-R2:5’-TGGATGATTTTATCGCTCATACCACCAATCTGTTCACGAT-3’； PCR产物经1％琼脂糖凝胶，切胶回收得到SUMO片段； SMUO与TrxA-Mgfp-3B的基因片段通过PCR进行连接，PCR产物经1％琼脂糖凝胶，切胶回收得到SMUO-TrxA-Mgfp-3B基因片段； 将SMUO-TrxA-Mgfp-3B基因片段转入质粒pET-28a+中构建成表达载体pET-28a+-SUMO-TrxA-Mgfp-3B。

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