宁波大学葛体达获国家专利权
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龙图腾网获悉宁波大学申请的专利高效提取和检测红壤病毒的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115927542B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310061733.5,技术领域涉及:C12Q1/6806;该发明授权高效提取和检测红壤病毒的方法是由葛体达;王双;虞森祥;祝贞科;魏亮;肖谋良设计研发完成,并于2023-01-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本高效提取和检测红壤病毒的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种典型红壤病毒的高效提取和检测的方法,属于土壤生物化学与环境领域,本发明克服了红壤对病毒吸附力强,不易提取的困难,对研究红壤病毒丰度、病毒多样性、病毒与宿主之间的相互作用、以及由病毒介导的生物地球化学过程具有重要意义。
本发明授权高效提取和检测红壤病毒的方法在权利要求书中公布了:1.一种高效提取和检测红壤病毒的方法,其特征在于,包括以下步骤: S1:称取除去砂石和植物根系的新鲜红壤土样; S2:加入缓冲液,0~4℃下超声1~10分钟,超声过程中振荡土壤悬液,超声结束后4℃离心,所述缓冲液为pH=4.6的柠檬酸钾缓冲液,所述柠檬酸钾缓冲液中包括10gL的柠檬酸钾、10%体积分数的磷酸盐缓冲液、5mM的乙二胺四乙酸和150mM的硫酸镁,超声时的参数为:频率40kHz,时长1~10min; S3:吸取步骤S2中离心后的上清液,过滤除菌,得到病毒提取液; S4:使用DNA酶处理病毒提取液,37摄氏度下孵育30~90分钟; S5:对16SrRNA基因进行PCR扩增,检测游离DNA是否去除干净,琼脂糖凝胶电泳显示无条带合格,即为病毒溶液; S6:检测步骤S5所述病毒溶液中病毒形态并计算病毒丰度,具体步骤为: a:将病毒溶液加载到滤膜上,干燥滤膜; b:将步骤a中干燥后的滤膜浸入染色液中,染色,染色结束后干燥滤膜; c:在载玻片上滴加防褪色液,将步骤b中干燥后的滤膜浸入防褪色液中,盖上盖玻片并滴加防褪色液,制成观察用玻片; d:在荧光显微镜488nm下观察步骤c制得的观察用玻片,拍摄荧光照片,对荧光照片进行计数; e:计算病毒丰度,计算病毒丰度的公式为: Vt=a×K1÷K2×V+m×ω÷[m×100%-ω], 其中,Vt:土壤中病毒丰度病毒数量g干土;a:荧光显微镜下平均每个视野场内病毒数;K1:AnodiscAl2O3膜的面积μm2;K2:视野场的面积μm2;V:缓冲液体积mL;m:土壤质量g;ω:土壤含水率%; f:使用30-50K超滤管将病毒溶液浓缩10~1000倍,制成病毒浓缩液,将病毒浓缩液滴加到铜网网格上,用1%磷钨酸对网格进行负染,并使用透射电子显微镜观察病毒形态。
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