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龙图腾网获悉中国农业大学申请的专利基于CRISPR-Cas9系统和PB转座子系统的羊早期胚胎发育的谱系示踪方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116103342B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211612527.0，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权基于CRISPR-Cas9系统和PB转座子系统的羊早期胚胎发育的谱系示踪方法是由于坤;邓守龙;许雪玲;李岩;连正兴设计研发完成，并于2022-12-14向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于CRISPR-Cas9系统和PB转座子系统的羊早期胚胎发育的谱系示踪方法在说明书摘要公布了：本发明公开了基于CRISPR‑Cas9系统和PB转座子系统的羊早期胚胎发育的谱系示踪方法，具体是CRISPR‑Cas9介导的羊Rosa26基因敲除和定点插入Cas9‑T2A‑EGFP基因的方法，用来对合成靶DNA进行编辑。本发明还提供由合成靶DNA介导的谱系示踪载体。该载体包含40种整合条码和合成靶DNA及相应的三个独立转录sgRNA。该合成靶DNA嵌入在表达红色荧光蛋白tdTomato的PB转座子载体上。此系统能够产生大量的可遗传修复结果，并可通过整合条形码对这些序列进行区分。该谱系示踪载体体系可直接转染目标细胞，随着发育对目标细胞进行追踪，提供反刍动物发育的综合分子细胞图谱，应用前景广阔。

本发明授权基于CRISPR-Cas9系统和PB转座子系统的羊早期胚胎发育的谱系示踪方法在权利要求书中公布了：1.用于反刍动物谱系示踪的载体体系，其特征在于，其是由40种用于反刍动物谱系示踪的载体组成，其中每种载体携带有不同的整合条形码intBC； 所述用于反刍动物谱系示踪的载体是将谱系示踪载体插入到表达红色荧光蛋白的PB转座子载体上构建得到的； 所述谱系示踪载体包括整合条形码intBC、合成靶DNA序列以及靶向所述合成靶DNA序列的三个独立转录的sgRNA； 所述谱系示踪载体包括如下结构：整合条形码intBC-合成靶DNA序列-bGHpolyA-三个独立转录的sgRNA； 所述合成靶DNA序列包含三个位点ade2、bam3和whiteB，分别记为位点1～位点3，其核苷酸序列如SEQIDNO:6所示； 所述三个独立转录的sgRNA分别靶向位点1～位点3； 用于扩增整合条形码intBC的引物如下： 其中靶向位点1的sgRNA受mU6启动子控制，靶向位点2的sgRNA受hU6启动子控制，靶向位点3的sgRNA受bU6启动子控制； 所述谱系示踪载体的结构中，合成靶DNA序列-bGHpolyA-三个独立转录的sgRNA的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示。

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