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龙图腾网获悉河南农业大学申请的专利十二指肠贾第虫CP1、CP2基因的间接ELISA检测方法及试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116626292B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310478176.7，技术领域涉及：G01N33/569；该发明授权十二指肠贾第虫CP1、CP2基因的间接ELISA检测方法及试剂盒是由董海聚;陈明辉;刘芳;代宏宇;王步康;汪海东;眭玉珍;左守军;宋鹏涛;栗亮亮设计研发完成，并于2023-04-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本十二指肠贾第虫CP1、CP2基因的间接ELISA检测方法及试剂盒在说明书摘要公布了：本发明基于十二指肠贾第虫CP1、CP2蛋白基因构建pET‑32a‑CP1、pET‑32a‑CP2表达载体，并转入RosettaDE3感受态细胞内利用IPTG诱导表达，SDS‑PAGE检测分析重组蛋白的表达形式后采用Ni‑NTA亲和层析法对其进行纯化，并以此为包被抗原建立了两种间接ELISA方法。本发明基于重组蛋白CP1、CP2建立的间接ELISA方法具有良好的特异性，敏感性和重复性，与显微镜检测结果的符合率分别为98％和94％。

本发明授权十二指肠贾第虫CP1、CP2基因的间接ELISA检测方法及试剂盒在权利要求书中公布了：1.试剂在制备用于检测十二指肠贾第虫CP1或CP2蛋白的间接ELISA检测试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂盒包含重组蛋白CP1多克隆抗体或重组蛋白CP2多克隆抗体作为一抗试剂； 其中，所述重组蛋白CP1多克隆抗体或重组蛋白CP2多克隆抗体的效价在128,000以上； 所述重组蛋白CP1或CP2通过如下方法制备： 以提取自贾第虫滋养体的总基因组DNA为模板，使用特异性引物扩增获得CP1或CP2基因，其中CP1基因的引物序列为SEQIDNO.1：5'-GGATCCATGGCTTTATCTTTGCTCTTGG-3'和SEQIDNO.2：5'-CTCGAGCTAGTCAAGATATACAGCAT-3'，CP2基因的引物序列为SEQIDNO.3：5'-GGATCCATGAAGCTCTTTCTCCT-3'和SEQIDNO.4：5'-CTCGAGTTACTCATCGAAGAAGCCCG-3'； 将扩增所得CP1或CP2基因分别与克隆载体pMD18-T连接，构建重组质粒pMD18-T-CP1或pMD18-T-CP2； 将构建好的重组质粒pMD18-T-CP1、pMD18-T-CP2转化感受态细胞DH5α扩大培养，对测序结果正确的pMD18-T-CP1、pMD18-T-CP2克隆载体与pET-32a+载体进行BamHIXhoI双酶切，将酶切后的CP1、CP2基因与酶切后的pET-32a+载体进行连接，制备得到pET-32a-CP1、pET-32a-CP2重组表达质粒； 将上述pET-32a-CP1、pET-32a-CP2重组表达质粒转入RosettaDE3感受态细胞，经1mMIPTG于37℃诱导4小时表达后，收集菌体，超声破碎，分离包涵体，经8M尿素变性、梯度透析复性，并通过Ni-NTA亲和层析纯化，获得纯度≥91%、浓度≥0.48mgmL的CP1或CP2重组蛋白。

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