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甘肃农业大学牛二波获国家专利权

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龙图腾网获悉甘肃农业大学申请的专利基于RT-LAMP-CRISPR/Cas12b的甜菜西方黄化病毒微流控检测试剂盒及方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119332026B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411651826.4,技术领域涉及:C12Q1/70;该发明授权基于RT-LAMP-CRISPR/Cas12b的甜菜西方黄化病毒微流控检测试剂盒及方法是由牛二波;杨文清;王嘉荟;杨顺义;徐秉良;万子旖设计研发完成,并于2024-11-19向国家知识产权局提交的专利申请。

基于RT-LAMP-CRISPR/Cas12b的甜菜西方黄化病毒微流控检测试剂盒及方法在说明书摘要公布了:本发明属于分子生物学、免疫学和病毒学技术领域,公开了一种基于RT‑LAMP‑CRISPRCas12b的甜菜西方黄化病毒微流控检测试剂盒及方法,本发明利用棉籽糖动态扩散系统将等温扩增LAMP和CRISPRCas12b检测连接在一个反应室中,并通过微流控芯片实现了多样本同时检测。本检测方法有效避免了气溶胶污染,具有优良的特异性、灵敏性和可视化优势,操作简便,无需昂贵的仪器设备,可简便、快捷在田间检测出辣椒和甜菜样品是否受到甜菜西方黄化病毒的侵染,提高检测效率。

本发明授权基于RT-LAMP-CRISPR/Cas12b的甜菜西方黄化病毒微流控检测试剂盒及方法在权利要求书中公布了:1.一种基于RT-LAMP-CRISPRCas12b的甜菜西方黄化病毒微流控检测试剂盒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤1,提取待检测样品的RNA; 步骤2,将待测样品RNA加入至微流控芯片加样室; 步骤3,在所述微流控芯片的检测室中预先装载包含crRNA和探针的CRISPRCas12b检测体系; 步骤4,将棉籽糖与含有引物的RT-LAMP扩增体系混合,然后加入注入孔; 步骤5,步骤2在步骤4推动下聚集于步骤3底部; 步骤6,将完成步骤5的微流控芯片置于恒温加热器中进行扩增和检测,得到检测产物; 步骤7,将检测产物进行Cas12核酸试纸条检测,试纸条质控线和检测线均出现红色条带,结果为阳性;试纸条质控线出现红色条带,检测线不显色,结果为阴性;所述试纸条质控线为C线;检测线为T线; 所述步骤3中CRISPRCas12b检测体系为:10×Cas12b反应缓冲液3μL,5μMAapCas12b蛋白酶1μL,500nMcrRNA5μL,2μMssDNA探针12μL,加纯水补至30μL; 所述步骤4中RT-LAMP扩增体系为:2×LAMPMasterMix12.5μL,40μM内引物FIP和BIP各1.6μL,5μM外引物F3和B3各0.2μL,20μM环引物LB0.4μL,5M甜菜碱3μL,待测样品RNA1μL,加纯水补至25μL;RT-LAMP扩增引物包括如下引物对:F3B3核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示;FIPBIP核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示;LB核苷酸序列如SEQIDNO.5所示;所述CRISPRCas12b检测体系包括crRNA核苷酸序列如SEQIDNO.6所示;ssDNA序列如SEQIDNO.7所示。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人甘肃农业大学,其通讯地址为:730070 甘肃省兰州市安宁区营门村1号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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