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龙图腾网获悉深圳细胞谷生物医药有限公司申请的专利通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒的方法及其工程化类病毒颗粒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120866241B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-30发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511399743.5，技术领域涉及：C12N7/04；该发明授权通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒的方法及其工程化类病毒颗粒是由王建勋;史渊源;柴瑞楷;赵丽君设计研发完成，并于2025-09-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒的方法及其工程化类病毒颗粒在说明书摘要公布了：本发明提供一种通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒的方法及其工程化类病毒颗粒，本发明通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒的方法，所述方法包括以下构建BaEV逆转录病毒稳定包装细胞系、将Gag‑Cas9的质粒转染步骤1得到的所述BaEV逆转录病毒稳定包装细胞系、构建用于逆转录病毒包装系统的自失活递送质粒和选得到可以生产工程化类病毒颗粒的稳定细胞系，从而可以通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒。本发明中，创新性地开发了eVLP稳定细胞系制备方法，该方案突破现有生产瓶颈，为科研和临床提供稳定、高效、经济的基因编辑载体解决方案，推动基因治疗领域的进一步发展。

本发明授权通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒的方法及其工程化类病毒颗粒在权利要求书中公布了：1.通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 步骤1：构建BaEV逆转录病毒稳定包装细胞系，包括将构建逆转录病毒制备所需的结构蛋白gag-pol蛋白转进HEK293T细胞系或其衍生细胞系，得到相应含结构蛋白gag-pol蛋白的细胞系；在所述含结构蛋白gag-pol蛋白的细胞系基础上，构建同时敲除ASCT-1和ASCT-2受体蛋白的HEK293T细胞系或其衍生细胞系，得到相应敲除ASCT-1和ASCT-2受体蛋白的细胞系；将BaEV包膜转入上述敲除ASCT-1和ASCT-2受体蛋白的细胞系，从而得到所述BaEV逆转录病毒稳定包装细胞系； 步骤2：将含Gag-Cas9的质粒转染步骤1得到的所述BaEV逆转录病毒稳定包装细胞系，筛选得到能够生产包含BaEV包膜糖蛋白、gag-pol蛋白和Cas9蛋白的工程化类病毒颗粒的细胞系，所述含Gag-Cas9的质粒是以pCMV-MMLVgag-3xNES-Cas9作为骨架，通过无缝克隆方法在Cas9-PolyA后面添加hPGK启动子与BSD抗性基因元件构建制备得到的pCMV-MMLVgag-3xNES-Cas9-PolyA-hPGK-BSD； 步骤3：构建用于逆转录病毒包装系统的自失活递送质粒，该自失活递送质粒包括靶向不同靶点gRNA元件；该自失活递送质粒转染293T细胞或Ampho293细胞，然后通过该转染后细胞生产自失活靶向不同靶点的逆转录病毒； 步骤4：使用步骤3得到的逆转录病毒转导步骤2得到的细胞系，从中筛选得到可以生产工程化类病毒颗粒的稳定细胞系，从而可以通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒； 在步骤2中，通过药筛以及有限稀释法挑选出单克隆细胞株，提取其基因组DNA并通过检测细胞基因组中Cas9基因和Pol基因分子的拷贝数，计算Cas9基因Pol基因的比值以及Pol基因内参基因的比值，用于筛选得到步骤2中的细胞系，所述Cas9基因Pol基因的比值在0.4-1.2之间，所述内参基因是RPPH，Pol基因内参基因的比值0.7； 步骤3中的所述自失活递送质粒包括修饰的LTR结构，该结构包含5'LTR和经过ΔU3修饰的3'LTR，使得病毒基因组整合入宿主细胞后，ΔU3修饰的3'LTR转移至5'端会导致启动子功能失活，从而阻断完整5'LTR-3'LTR结构的再生成，防止递送质粒被重新包装。

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