中国中医科学院中药研究所袁媛获国家专利权
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龙图腾网获悉中国中医科学院中药研究所申请的专利快速筛选高纯合度天麻的方法及其所用引物组合物获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN114990252B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-10发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210581296.5,技术领域涉及:C12Q1/6895;该发明授权快速筛选高纯合度天麻的方法及其所用引物组合物是由袁媛;华中一;赵玉洋;黄璐琦设计研发完成,并于2022-05-26向国家知识产权局提交的专利申请。
本快速筛选高纯合度天麻的方法及其所用引物组合物在说明书摘要公布了:本发明公开了快速筛选高纯合度天麻的方法及其所用引物组合物。本发明所要解决的技术问题是如何筛选或辅助筛选高纯合度天麻品种。本发明提供了鉴定天麻的RFLP分子标记位点的试剂,通过检测待测天麻的RFLP分子标记位点基因型,鉴定或辅助鉴定天麻品种的纯合度;不同天麻品种基因组DNA片段RFLP位点的PCR产物酶切后凝胶电泳结果可出现不同数量的条带,选择天麻品种基因组DNA片段RFLP位点的纯合度等于大于95%为高纯合度天麻品种。将检测所述天麻基因组中RFLP分子标记位点的组合物质与其他物质如检测其他与天麻纯合度相关的分子标记的单核苷酸多态性或基因型的物质联合在一起制备鉴定天麻高纯度品种产品。
本发明授权快速筛选高纯合度天麻的方法及其所用引物组合物在权利要求书中公布了:1.鉴定天麻的RFLP分子标记位点的试剂,其特征在于:所述RFLP分子标记位点为20个SNP位点,所述20个SNP位点由E1标记位点、E2标记位点、E3标记位点、E4标记位点、E5标记位点、E6标记位点、E7标记位点、E8标记位点、E9标记位点、E10标记位点、E11标记位点、H1标记位点、H2标记位点、H3标记位点、S1标记位点、X1标记位点、X2标记位点、X3标记位点、X4标记位点和X5标记位点组成, 所述E1标记位点是天麻3号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为T或G,为天麻基因组中SEQIDNo.1的第435位核苷酸, 所述E2标记位点是天麻7号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为A或C,为天麻基因组中SEQIDNo.2的第392位核苷酸, 所述E3标记位点是天麻1号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为G或C,为天麻基因组中SEQIDNo.3的第360位核苷酸, 所述E4标记位点是天麻2号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为C或T,为天麻基因组中SEQIDNo.4的第409位核苷酸, 所述E5标记位点是天麻2号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为C或G,为天麻基因组中SEQIDNo.5的第171位核苷酸, 所述E6标记位点是天麻8号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为T或C,为天麻基因组中SEQIDNo.6的第313位核苷酸, 所述E7标记位点是天麻17号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为A或G,为天麻基因组中SEQIDNo.7的第280位核苷酸, 所述E8标记位点是天麻2号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为C或A,为天麻基因组中SEQIDNo.8的第347位核苷酸, 所述E9标记位点是天麻3号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为A或G,为天麻基因组中SEQIDNo.9的第140位核苷酸, 所述E10标记位点是天麻4号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为C或A,为天麻基因组中SEQIDNo.10的第333位核苷酸, 所述E11标记位点是天麻5号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为G或A,为天麻基因组中SEQIDNo.11的第330位核苷酸, 所述H1标记位点是天麻5号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为C或T,为天麻基因组中SEQIDNo.12的第194位核苷酸, 所述H2标记位点是天麻14号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为C或T,为天麻基因组中SEQIDNo.13的第460位核苷酸, 所述H3标记位点是天麻14号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为C或T,为天麻基因组中SEQIDNo.14的第133位核苷酸, 所述S1标记位点是天麻10号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为G或C,为天麻基因组中SEQIDNo.15的第387位核苷酸, 所述X1标记位点是天麻1号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为A或C,为天麻基因组中SEQIDNo.16的第350位核苷酸, 所述X2标记位点是天麻5号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为A或G,为天麻基因组中SEQIDNo.17的第288位核苷酸, 所述X3标记位点是天麻8号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为G或A,为天麻基因组中SEQIDNo.18的第310位核苷酸, 所述X4标记位点是天麻12号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为T或C,为天麻基因组中SEQIDNo.19的第311位核苷酸, 所述X5标记位点是天麻6号染色体上的一个位点,其核苷酸种类为A或G,为天麻基因组中SEQIDNo.20的第186位核苷酸; 所述试剂由名称为E1组的组合物、E2组的组合物、E3组的组合物、E4组的组合物、E5组的组合物、E6组的组合物、E7组的组合物、E8组的组合物、E9组的组合物、E10组的组合物、E11组的组合物、H1组的组合物、H2组的组合物、H3组的组合物、S1组的组合物、X1组的组合物、X2组的组合物、X3组的组合物、X4组的组合物、X5组的组合物共20种组合物组成, 所述E1组由名称为E1引物对的扩增包括所述E1标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E2组由名称为E2引物对的扩增包括所述E2标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E3组由名称为E3引物对的扩增包括所述E3标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E4组由名称为E4引物对的扩增包括所述E4标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E5组由名称为E5引物对的扩增包括所述E5标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E6组由名称为E6引物对的扩增包括所述E6标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E7组由名称为E7引物对的扩增包括所述E7标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E8组由名称为E8引物对的扩增包括所述E8标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E9组由名称为E9引物对的扩增包括所述E9标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E10组由名称为E10引物对的扩增包括所述E10标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述E11组由名称为E11引物对的扩增包括所述E11标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶EcoRⅠ组成, 所述H1组由名称为H1引物对的扩增包括所述H1标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶HindⅢ组成, 所述H2组由名称为H2引物对的扩增包括所述H2标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶HindⅢ组成, 所述H3组由名称为H3引物对的扩增包括所述H3标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶HindⅢ组成, 所述S1组由名称为S1引物对的扩增包括所述S1标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶SalⅠ组成, 所述X1组由名称为X1引物对的扩增包括所述X1标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶XbaI组成, 所述X2组由名称为X2引物对的扩增包括所述X2标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶XbaI组成, 所述X3组由名称为X3引物对的扩增包括所述X3标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶XbaI组成, 所述X4组由名称为X4引物对的扩增包括所述X4标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶XbaI组成, 所述X5组由名称为X5引物对的扩增包括所述X5标记位点在内的天麻基因组DNA片段的引物组合物和限制性核酸内切酶XhoI组成; 所述E1引物对由名称分别为E1-F和E1-R的两种单链DNA组成,所述E1-F的核苷酸序列是序列表中序列1的第1-20位,所述E1-R的核苷酸序列与序列表中序列1的第691-710位反向互补, 所述E2引物对由名称分别为E2-F和E2-R的两种单链DNA组成,所述E2-F的核苷酸序列是序列表中序列2的第1-20位,所述E2-R的核苷酸序列与序列表中序列2的第565-584位反向互补, 所述E3引物对由名称分别为E3-F和E3-R的两种单链DNA组成,所述E3-F的核苷酸序列是序列表中序列3的第1-20位,所述E3-R的核苷酸序列与序列表中序列3的第571-590位反向互补, 所述E4引物对由名称分别为E4-F和E4-R的两种单链DNA组成,所述E4-F的核苷酸序列是序列表中序列4的第1-20位,所述E4-R的核苷酸序列与序列表中序列4的第554-573位反向互补, 所述E5引物对由名称分别为E5-F和E5-R的两种单链DNA组成,所述E5-F的核苷酸序列是序列表中序列5的第1-20位,所述E5-R的核苷酸序列与序列表中序列5的第395-416位反向互补, 所述E6引物对由名称分别为E6-F和E6-R的两种单链DNA组成,所述E6-F的核苷酸序列是序列表中序列6的第1-20位,所述E6-R的核苷酸序列与序列表中序列6的第474-494位反向互补, 所述E7引物对由名称分别为E7-F和E7-R的两种单链DNA组成,所述E7-F的核苷酸序列是序列表中序列7的第1-22位,所述E7-R的核苷酸序列与序列表中序列7的第439-458位反向互补, 所述E8引物对由名称分别为E8-F和E8-R的两种单链DNA组成,所述E8-F的核苷酸序列是序列表中序列8的第1-20位,所述E8-R的核苷酸序列与序列表中序列8的第446-466位反向互补, 所述E9引物对由名称分别为E9-F和E9-R的两种单链DNA组成,所述E9-F的核苷酸序列是序列表中序列9的第1-20位,所述E9-R的核苷酸序列与序列表中序列9的第381-400位反向互补, 所述E10引物对由名称分别为E10-F和E10-R的两种单链DNA组成,所述E10-F的核苷酸序列是序列表中序列10的第1-22位,所述E10-R的核苷酸序列与序列表中序列10的第495-514位反向互补, 所述E11引物对由名称分别为E11-F和E11-R的两种单链DNA组成,所述E11-F的核苷酸序列是序列表中序列11的第1-21位,所述E11-R的核苷酸序列与序列表中序列11的第501-522位反向互补, 所述H1引物对由名称分别为H1-F和H1-R的两种单链DNA组成,所述H1-F的核苷酸序列是序列表中序列12的第1-20位,所述H1-R的核苷酸序列与序列表中序列12的第482-501位反向互补, 所述H2引物对由名称分别为H2-F和H2-R的两种单链DNA组成,所述H2-F的核苷酸序列是序列表中序列13的第1-20位,所述H2-R的核苷酸序列与序列表中序列13的第634-653位反向互补, 所述H3引物对由名称分别为H3-F和H3-R的两种单链DNA组成,所述H3-F的核苷酸序列是序列表中序列14的第1-20位,所述H3-R的核苷酸序列与序列表中序列14的第517-536位反向互补, 所述S1引物对由名称分别为S1-F和S1-R的两种单链DNA组成,所述S1-F的核苷酸序列是序列表中序列15的第1-20位,所述S1-R的核苷酸序列与序列表中序列15的第543-564位反向互补, 所述X1引物对由名称分别为X1-F和X1-R的两种单链DNA组成,所述X1-F的核苷酸序列是序列表中序列16的第1-20位,所述X1-R的核苷酸序列与序列表中序列16的第630-649位反向互补, 所述X2引物对由名称分别为X2-F和X2-R的两种单链DNA组成,所述X2-F的核苷酸序列是序列表中序列17的第1-22位,所述X2-R的核苷酸序列与序列表中序列17的第564-585位反向互补, 所述X3引物对由名称分别为X3-F和X3-R的两种单链DNA组成,所述X3-F的核苷酸序列是序列表中序列18的第1-20位,所述X3-R的核苷酸序列与序列表中序列18的第512-531位反向互补, 所述X4引物对由名称分别为X4-F和X4-R的两种单链DNA组成,所述X4-F的核苷酸序列是序列表中序列19的第1-21位,所述X4-R的核苷酸序列与序列表中序列19的第526-547位反向互补, 所述X5引物对由名称分别为X5-F和X5-R的两种单链DNA组成,所述X5-F的核苷酸序列是序列表中序列20的第1-20位,所述X5-R的核苷酸序列与序列表中序列20的第511-530位反向互补。
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