北京百迈客生物科技有限公司郑洪坤获国家专利权
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龙图腾网获悉北京百迈客生物科技有限公司申请的专利用于纳米孔测序的单细胞或微量样本全长转录组文库构建方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN112853503B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202110312522.5,技术领域涉及:C40B50/06;该发明授权用于纳米孔测序的单细胞或微量样本全长转录组文库构建方法是由郑洪坤;刘敏;陈钰萌;张梦龙设计研发完成,并于2021-03-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本用于纳米孔测序的单细胞或微量样本全长转录组文库构建方法在说明书摘要公布了:本发明涉及单细胞测序技术领域,具体涉及用于纳米孔测序的单细胞或微量样本全长转录组文库构建方法。本发明提供的文库构建方法包括:将单细胞或微量样本裂解后,采用Smart‑seq2方法将mRNA反转录制备cDNA,以所述cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR扩增产物进行FFPE和末端修复,再连接纳米孔测序接头。该方法可以实现真正的单细胞测序,且兼具转录本覆盖度高、分辨率高、灵活性强的优点,可应用于单细胞的差异基因表达分析、转录本结构分析、全长isoform鉴定等。
本发明授权用于纳米孔测序的单细胞或微量样本全长转录组文库构建方法在权利要求书中公布了:1.用于纳米孔测序的单细胞或微量样本全长转录组文库构建方法,其特征在于,包括: 将单细胞或微量样本裂解后,采用Smart‑seq2方法将mRNA反转录制备cDNA,以所述cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR扩增产物进行FFPE和末端修复,再连接纳米孔测序接头; 所述FFPE和末端修复的反应条件为:将反应体系于20℃反应30‑35min,再于65℃反应10min,或者,先在PCR纯化产物中加入FFPE Master Mix和FFPE buffer,于20℃反应10‑15min,再加入Endprep Master Mix、Endprep buffer和水,于20℃反应30‑35min,再于65℃反应10min; 所述连接纳米孔测序接头的反应条件为:22‑25℃反应1‑1.5h; 所述FFPE和末端修复的60μL反应体系包括如下组分:PCR纯化产物200‑1500ng,FFPE buffer 3.5μL,FFPE Master Mix 2μL,Endprep buffer 3.5μL,Endprep Master Mix 2‑3μL,水补足至总体积60μL; 所述连接纳米孔测序接头的60μL反应体系包括如下组分:FFPE和末端修复纯化产物100‑1300ng,ONT LBN 25μL,ONT Adapter Mix5μL,T4 DNA连接酶10μL,水补足至总体积60μL。
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