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龙图腾网获悉浙江省园林植物与花卉研究所(浙江省萧山棉麻研究所)申请的专利一种利用胚性愈伤组织分离金银花原生质体的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115558628B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-13发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211391686.2，技术领域涉及：C12N5/04；该发明授权一种利用胚性愈伤组织分离金银花原生质体的方法是由朱开元;许雯婷;刘慧春;张加强;周江华;史小华设计研发完成，并于2022-11-08向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种利用胚性愈伤组织分离金银花原生质体的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种利用胚性愈伤组织分离金银花原生质体的方法，包括如下步骤：D.酶解，取金银花胚性愈伤组织，用细胞筛过滤至无菌离心管中，水平离心5min，弃上清液；加入10mL酶解液，用移液枪轻轻吸打，使愈伤细胞重新悬浮，在25℃黑暗条件下，震荡酶解2‑4h；E.原生质体提取，酶解完成后，向酶解液中加入等体积的预冷的W5溶液，震荡3min；用细胞筛过滤酶解液；水平离心5min，弃上清液；加入5ml预冷W5溶液重悬原生质体，冰浴30min；水平离心5min后，弃上清液；加入5ml预冷MMG溶液重悬原生质体后，水平离心5min，弃上清液，沉淀即为原生质体。本方案采用金银花胚性愈伤组织制备金银花原生质体，酶解时间短，使得金银花原生质体得率高达20.40×1066个g，活性系数高达92％。

本发明授权一种利用胚性愈伤组织分离金银花原生质体的方法在权利要求书中公布了：1.一种利用胚性愈伤组织分离金银花原生质体的方法，其特征在于，包括如下步骤： A.消毒采集长度在2.5‑3.0 cm的金银花花芽，放入洗洁精溶液中浸泡10min，期间轻轻揉搓，接着用流水冲洗干净，而后放入0.1% NaClO溶液中浸泡5min；再用流水冲洗1h；吸干水后在超净工作台上用紫外线照射20min；然后放入75% 酒精中消毒1min；最后用无菌水冲洗3遍； B.胚性愈伤诱导将消毒后的金银花花芽吸去表面水分，将子房切下，接种至胚性愈伤诱导培养基，将闭合的花瓣打开，取出花药，接种至胚性愈伤诱导培养基，所述胚性愈伤诱导培养基的成分为：MS 4.4gL，蔗糖30gL，水解酪蛋白2gL，琼脂7.5gL，2,4‑D 2mgL，6‑BA 1mgL，AgNO3 2mgL，pH为5.8‑6.0； C.胚性愈伤组织液体增殖选取颜色嫩黄、增殖旺盛的金银花胚性愈伤组织，接种至液体增殖培养基，置于转速为120rpm的摇床上避光培养，温度25℃，湿度45‑55%；所述液体增殖培养基的成分为：MS 4.4gL，蔗糖30gL，水解酪蛋白2gL，2,4‑D 0.2mgL，6‑BA 0.1mgL，pH为5.8‑6.0； D. 酶解取0.2g金银花胚性愈伤组织，用高温灭菌的80目细胞筛过滤至50mL无菌离心管中， RCF 100×g水平离心5min，弃上清液；加入10mL酶解液，用移液枪轻轻吸打，使愈伤细胞重新悬浮，在25℃ 黑暗条件下，30rpm震荡酶解2‑4h；其中，所述酶解液中，D‑甘露醇的质量浓度为11%，纤维素酶的质量浓度为1%，离析酶浓度的质量浓度为0.3%，MES的浓度为5 mM，BSA的质量浓度为0.1%，CaCl2的浓度为10mM； E. 原生质体提取酶解完成后，向酶解液中加入等体积的预冷的W5溶液，30rpm震荡3min；用预冷W5溶液润洗200目细胞筛后，过滤酶解液；RCF 100×g 水平离心5min，弃上清液；加入5ml预冷W5溶液重悬原生质体，冰浴30min；RCF 100×g 水平离心5min后，弃上清液；加入5ml预冷MMG溶液重悬原生质体后，RCF 100×g 水平离心5min，弃上清液，沉淀即为原生质体。

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