武汉大学中南医院刘亮获国家专利权
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龙图腾网获悉武汉大学中南医院申请的专利基于双探针原位定量检测目标蛋白质特异性糖基化的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116087524B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210908561.6,技术领域涉及:G01N33/68;该发明授权基于双探针原位定量检测目标蛋白质特异性糖基化的方法是由刘亮;孙波;卢云;李文婧;汪辰龙;刘云坤设计研发完成,并于2022-07-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于双探针原位定量检测目标蛋白质特异性糖基化的方法在说明书摘要公布了:本申请涉及生物检测技术领域,特别涉及一种基于双探针原位定量检测目标蛋白质特异性糖基化的方法。本申请提供的方法包括以下步骤:利用蛋白质探针和聚糖探针分别与目标蛋白质及目标聚糖结合,结合后的空间临近关系触发同一目标蛋白质上的探针之间杂交形成杂交双链;所述蛋白质探针的DNA酶在金属辅因子的作用下酶切所述杂交双链上的聚糖探针;通过对酶切后的聚糖探针释放的报告肽进行质谱定量分析,从而将蛋白质特异性糖型的信号转化为质谱信号。
本发明授权基于双探针原位定量检测目标蛋白质特异性糖基化的方法在权利要求书中公布了:1.非诊断目的的基于双探针原位定量检测蛋白质特异性糖基化的方法,其特征在于,包括以下步骤: 利用蛋白质探针和聚糖探针分别与目标蛋白质及目标聚糖结合,结合后的空间临近关系触发同一目标蛋白质上的探针之间杂交形成杂交双链,所述蛋白质探针包含识别目标蛋白质的适配体和DNA酶,所述聚糖探针由与所述蛋白质探针的DNA酶序列部分互补的寡核苷酸序列、可被胰蛋白酶酶切为报告肽的底物肽段和二苯并环辛炔基团组成; 所述蛋白质探针的DNA酶在金属辅因子的作用下酶切所述杂交双链上的聚糖探针,所述金属辅因子选用镁离子; 通过对酶切后的聚糖探针释放的报告肽进行质谱定量分析,从而将蛋白质特异性糖型的信号转化为质谱信号; 在所述蛋白质探针的DNA酶在金属辅因子的作用下酶切所述杂交双链上的聚糖探针之后,还包括: 蛋白质探针恢复到单链状态,并保持完整的结构继续参与到下一轮杂交和酶切;循环利用蛋白质探针的DNA酶酶切与目标蛋白结合的所有聚糖探针; 利用蛋白质探针和聚糖探针分别与目标蛋白质及目标聚糖结合具体包括: 蛋白质探针的核酸适配体识别MUC1蛋白并与其结合; MUC1蛋白的末端唾液酸被高碘酸盐氧化,引入醛基;在异双功能官能团交联剂的作用下,与聚糖探针上的二苯并环辛炔标签进行结合; 高碘酸盐采用浓度为1 mM的高碘酸钠,高碘酸钠中加入10 mM苯胺作为亲核催化剂,聚糖探针与目标聚糖结合时,孵育条件为以1μM 聚糖探针孵育1h,目标蛋白质为MUC1,目标聚糖为MUC1结合的末端唾液酸; 所述蛋白质探针的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示; 所述聚糖探针的核苷酸序列如SEQ ID No .2所示; 所述异双功能官能团交联剂选用叠氮‑PEG4‑酰肼盐酸盐。
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