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龙图腾网获悉天津医科大学总医院申请的专利一种细胞内凝血因子Ⅹ的质谱检测方法、应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116539893B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-13发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310438445.7，技术领域涉及：G01N33/68；该发明授权一种细胞内凝血因子Ⅹ的质谱检测方法、应用是由张建宁;刘丽;李啸天;张向阳;高妍设计研发完成，并于2023-04-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种细胞内凝血因子Ⅹ的质谱检测方法、应用在说明书摘要公布了：本发明属于质谱分析技术领域，尤其涉及一种细胞内凝血因子Ⅹ的质谱检测方法、应用，质谱检测方法包括以下步骤：特异性富集肿瘤细胞中异位合成的凝血因子Ⅹ，获得蛋白样品；蛋白样品利用SDS‑PAGE凝胶电泳进行蛋白样品固定、处理，使用凝胶成像系统扫描凝胶后，将凝胶放置于冰盒内保存；将凝胶内凝血因子Ⅹ进行凝胶内酶解消化，得到肽段溶液；将肽段溶液利用质谱技术检测肿瘤细胞内源性合成的凝血因子Ⅹ，得到质谱数据。本发明首次采用基于质谱的技术检测正常肝细胞外肿瘤细胞合成的凝血因子Ⅹ，利用蛋白质免疫沉淀技术将胶质瘤细胞中异位合成的凝血因子Ⅹ特异性的富集并进行SDS‑PAGE凝胶电泳，胶内酶解后利用质谱技术检测肿瘤细胞内源性合成的凝血因子Ⅹ。

本发明授权一种细胞内凝血因子Ⅹ的质谱检测方法、应用在权利要求书中公布了：1.一种细胞内凝血因子Ⅹ的质谱检测方法，其特征在于：包括以下步骤： S1：特异性富集肿瘤细胞中异位合成的凝血因子Ⅹ，获得蛋白样品；肿瘤细胞中异位合成的凝血因子Ⅹ的富集方法包括以下步骤： S101：配置高效蛋白裂解液并置于冰上； S102：PBS清洗细胞后加入相应量的高效蛋白裂解液并用移液枪吹打使其完全覆盖在细胞表面，冰上裂解30min； S103：用细胞刮刀将细胞及裂解液刮下并吸入至干净的EP管中，4℃12000rpm离心10min后，吸取30‑50ul蛋白上清作为input组，其余上清液吸至另一EP管中并用高效蛋白裂解液稀释至1000ul； S104：涡旋30s，吸取50ulDynabeads至2mLEP管中，放在磁力架上，吸除上清，将EP管移下来； S105：抗体结合：用200ulAbBindingandWashingbuffer使Dynabeads重悬，分别向实验组对照组中加入0.75‑1ul羊抗人Anti‑FXantibodyIgG,25℃孵育10分钟，弃上清后，加入抗体清洗液清洗，弃去上清； S106：分别加入100‑500ul样品裂解液重悬实验组与对照组Dynabeads，用封口膜封闭EP管口，置于旋转摇床上，室温孵育10min‑2h，结束孵育后吸去上清； S107：用200ulWashingBuffer洗涤3次后，加入100ulWashingBuffer重悬Dynabeads并吸入新的EP管中； S108：将EP管放在磁力架上，吸除上清后，加入20ulElutionBuffer重悬Dynabeads后加入5‑7ulloadingbuffer，100℃条件下煮沸10min，将EP管放置于磁力架上，吸取上清至干净的EP管备用，获得蛋白样品； S2：蛋白样品利用SDS‑PAGE凝胶电泳进行蛋白样品固定、处理，使用凝胶成像系统扫描凝胶后，将凝胶放置于冰盒内保存； S3：将凝胶内凝血因子Ⅹ进行凝胶内酶解消化，得到肽段溶液； S4：将肽段溶液利用质谱技术检测肿瘤细胞内源性合成的凝血因子Ⅹ，得到质谱数据； 以克服细胞膜蛋白受体结合的凝血因子Ⅹ以及血液中的凝血因子Ⅹ的干扰，检测正常肝细胞外肿瘤细胞内源性合成的凝血因子Ⅹ。

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