上海交通大学医学院附属仁济医院王楷文获国家专利权
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龙图腾网获悉上海交通大学医学院附属仁济医院申请的专利一种用于检测抗染色质抗体的ELISA试剂盒及其检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116754759B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310049931.X,技术领域涉及:G01N33/531;该发明授权一种用于检测抗染色质抗体的ELISA试剂盒及其检测方法是由王楷文;赵江峰;曹励欧;叶霜设计研发完成,并于2023-02-01向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于检测抗染色质抗体的ELISA试剂盒及其检测方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于检测抗染色质抗体的ELISA试剂盒。所述试剂盒内含有纯化后的天然结构的剥离H1组蛋白成分的染色质单体。本发明还公开了一种用于检测抗染色质抗体的ELISA试剂盒的检测方法。本发明的有益效果在于:在真核生物细胞核中,染色质结构复杂,是由40%的DNA、40%的组蛋白、20%非组蛋白、少量RNA和其他大分子构成的天然复合物,纯化技术要求高,购买成品化的天然纯化染色质单体价格更是昂贵。本申请针对天然染色质的结构,纯化出剥离H1组蛋白成分的染色质单体,既保留了其有效的抗原成分,也大大的缩减了成本。本发明的试剂盒,能用于抗染色质抗体检测,弥补了国内抗染色质抗体检测方法的空白,具有检测通量大、结果确切、灵敏度高、操作简便的特点。
本发明授权一种用于检测抗染色质抗体的ELISA试剂盒及其检测方法在权利要求书中公布了:1.一种用于检测抗染色质抗体的ELISA试剂盒,其特征在于,所述试剂盒内含有纯化后的剥离H1组蛋白成分的染色质单体; 所述剥离H1组蛋白成分的染色质单体来自如下方法: 步骤一,制备细胞核; 采集外周静脉血,加入ACD进行抗凝; 后将抗凝后的血液进行红细胞裂解至红细胞完全溶解取白色沉淀物; 在所述白色沉淀物当中加入缓冲液后混匀后采用蛋白酶K100μl和20%SDS水浴提取得纯核产物; 步骤二,提取染色质: 将所述纯核产物悬浮于pH7.6的Tris‑HCl缓冲液中并采用匀浆器匀浆,离心,弃上清,所得沉淀为粗染色质; 将所述粗染色质悬浮于pH7.6的脲素和PBS的混合溶液当中混匀,离心后弃上清,将沉淀洗涤后二次离心弃上清,保留沉淀; 在所述沉淀当中加入6.5%乙醇溶液洗涤后,离心后弃上清,所述洗涤为若干次以去除脲盐后得到染色质单体; 步骤三,H1蛋白去除: 天然染色质用微球菌核酸酶消化后,悬浮于0.005molL NH4Ac‑HAc pH4.5缓冲液中,进行分次提取; 将分次提取的产物分别离心沉淀后收集得到所述纯化后的剥离H1组蛋白成分的染色质单体。
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