北京化工大学刘惠玉获国家专利权
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龙图腾网获悉北京化工大学申请的专利一种基于λ核酸外切酶与脱氧核酶的双链核酸检测组合物及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120210330B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510694534.7,技术领域涉及:C12Q1/682;该发明授权一种基于λ核酸外切酶与脱氧核酶的双链核酸检测组合物及其应用是由刘惠玉;苏昕;康鑫淼设计研发完成,并于2025-05-28向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于λ核酸外切酶与脱氧核酶的双链核酸检测组合物及其应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于λ核酸外切酶与脱氧核酶的双链核酸检测组合物及其应用,属于生物技术领域中检验核酸的组合物及其使用方法,所要解决的技术问题是如何高效灵敏地检测双链核酸。本发明的基于λ核酸外切酶与脱氧核酶的双链核酸检测组合物包含双链核酸检测探针、λ核酸外切酶和报告分子,所述双链核酸检测探针包含一条名为识别链R的长单链DNA,以及n条名为Dz的短单链DNA;所述识别链R含有从5'至3'方向依次相邻排列的靶标结合域和n个Dz结合域;所述识别链R的5’端修饰有功能基团;所述Dz为单链时为可酶切所述报告分子的脱氧核酶,所述Dz的5'末端进行硫代修饰。本发明具有高灵敏度和特异性,检测限可低至飞摩级。
本发明授权一种基于λ核酸外切酶与脱氧核酶的双链核酸检测组合物及其应用在权利要求书中公布了:1.用于双链核酸检测的组合物,其特征在于,包含双链核酸检测探针、λ核酸外切酶和报告分子; 所述双链核酸检测探针用于识别待测样本中是否含有名称为双链靶标的目标双链核酸;所述双链核酸检测探针包含一条名称为识别链R的单链DNA,以及通过碱基互补配对与所述识别链R连接的n条名称为Dz的单链DNA;所述识别链R含有从5'至3'方向依次相邻排列的靶标结合域和n个Dz结合域;n条所述Dz通过n个所述Dz结合域和所述识别链R结合形成线性DNA复合体;所述靶标结合域能与所述双链靶标的一条链结合;所述识别链R的5’端修饰有功能基团以实现所述双链核酸检测探针与λ核酸外切酶的结合;所述Dz为能酶切所述报告分子的脱氧核酶,所述Dz的5'末端进行修饰以防止Dz被λ核酸外切酶降解; 所述报告分子为所述Dz的特异底物,所述报告分子为标记有荧光基团和相应淬灭基团的化合物; 所述脱氧核酶选自10‑23 DNA酶、8‑17 DNA酶、17E DNA酶、Mg5 DNA酶、39E DNA酶、EtNa DNA酶、Ce13d DNA酶中的任一种;所述10‑23 DNA酶的核心催化结构域序列如序列表中SEQ ID No:1的第2‑16位所示,其中字母M代表A或C,字母H代表A、C或T,N代表A、C、G或T,D代表A、G或T;所述8‑17 DNA酶的核心催化结构域为5’‑NNNNAGYNNNNNCGNN‑3’、5’‑NNNNAGYNNNNCGNN‑3’、5’‑NNNNAGYNNNNNCGN‑3’、5’‑NNNNAGYNNNNCGN‑3’中的任一种,其中字母N代表A、C、G或T,字母Y代表T或C; 所述n为1‑10的自然数; 所述功能基团为磷酸基团、羧基、氨基和巯基中的任一种; 所述淬灭基团为BHQ1;所述荧光基团为FAM; 所述组合物包含P1‑P7中的任一套: P1、以序列为SEQ ID No:8的单链DNA以及序列为SEQ ID No:9的单链DNA或序列为SEQ ID No:10的单链RNA组成的双链为双链靶标,所述双链核酸检测探针由一条序列为SEQ ID No:2的单链DNA和一条序列为SEQ ID No:4的单链DNA通过碱基互补配对结合而成,对应的特异底物是序列为SEQ ID No:6的DNA‑RNA嵌合物; P2、以序列为SEQ ID No:8的单链DNA以及序列为SEQ ID No:9的单链DNA或序列为SEQ ID No:10的单链RNA组成的双链为双链靶标,所述双链核酸检测探针由一条序列为SEQ ID No:3的单链DNA和一条序列为SEQ ID No:5的单链DNA通过碱基互补配对结合而成;对应的特异底物是序列为SEQ ID No:7的DNA‑RNA嵌合物; P3、以序列为SEQ ID No:8的单链DNA以及序列为SEQ ID No:9的单链DNA或序列为SEQ ID No:10的单链RNA组成的双链为双链靶标,所述双链核酸检测探针由一条序列为SEQ ID No:11的单链DNA和两条序列为SEQ ID No:4的单链DNA通过碱基互补配对结合而成;对应的特异底物是序列为SEQ ID No:6的DNA‑RNA嵌合物; P4、以序列为SEQ ID No:8的单链DNA以及序列为SEQ ID No:9的单链DNA或序列为SEQ ID No:10的单链RNA组成的双链为双链靶标,所述双链核酸检测探针由一条序列为SEQ ID No:12的单链DNA和一条序列为SEQ ID No:4的单链DNA通过碱基互补配对结合而成,对应的特异底物是序列为SEQ ID No:6的DNA‑RNA嵌合物; P5、以序列为SEQ ID No:8的单链DNA以及序列为SEQ ID No:9的单链DNA或序列为SEQ ID No:10的单链RNA组成的双链为双链靶标,所述双链核酸检测探针由一条序列为SEQ ID No:13的单链DNA和一条序列为SEQ ID No:4的单链DNA通过碱基互补配对结合而成,对应的特异底物是序列为SEQ ID No:6的DNA‑RNA嵌合物; P6、以序列为SEQ ID No:8的单链DNA以及序列为SEQ ID No:9的单链DNA或序列为SEQ ID No:10的单链RNA组成的双链为双链靶标,所述双链核酸检测探针由一条序列为SEQ ID No:14的单链DNA和一条序列为SEQ ID No:4的单链DNA通过碱基互补配对结合而成,对应的特异底物是序列为SEQ ID No:6的DNA‑RNA嵌合物; P7、以序列为SEQ ID No:15第1‑45位的单链DNA和序列与SEQ ID No:15第1‑45位反向互补的单链DNA组成的双链为双链靶标,所述双链核酸检测探针由一条序列为SEQ ID No: 15的单链DNA和一条序列为SEQ ID No:4的单链DNA通过碱基互补配对结合而成,对应的特异底物是序列为SEQ ID No:6的DNA‑RNA嵌合物。
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