浙江省农业科学院王柳获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江省农业科学院申请的专利一种用于赭曲霉毒素A检测的级联FRET适配体传感器及方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115453107B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211046714.7,技术领域涉及:G01N33/543;该发明授权一种用于赭曲霉毒素A检测的级联FRET适配体传感器及方法是由王柳;俞静;徐霞红;何开雨;权浩然设计研发完成,并于2022-08-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于赭曲霉毒素A检测的级联FRET适配体传感器及方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用于赭曲霉毒素AOTA检测的级联FRET适配体传感器及方法。包括供体纳米粒子和受体纳米粒子;供体纳米粒子外部修饰OTA适配体Apt;受体纳米粒子修饰OTA适配体的互补链,通过OTA适配体与互补链杂交,使受体纳米粒子能接受供体纳米粒子发射的荧光;受体纳米粒子的外部修饰受体荧光基团,能接受受体纳米粒子发射的荧光并实现自身的荧光发射,形成类似于级联传递的FRET传感器;OTA的存在使得适配体与互补链的杂交解离,从而导致供体纳米粒子的荧光无法传递到受体纳米粒子,受体荧光基团不被激发而无荧光发射。根据在供体纳米粒子的激发波长下受体探针上的荧光基团的荧光发射强度,可实现目标物检测。
本发明授权一种用于赭曲霉毒素A检测的级联FRET适配体传感器及方法在权利要求书中公布了:1.一种用于赭曲霉毒素A检测的级联FRET适配体传感器,其特征在于,级联FRET适配体传感器由供体聚合物纳米粒子和受体聚合物纳米粒子交联得到,供体聚合物纳米粒子修饰有OTA适配体,受体聚合物纳米粒子修饰有cDNA和荧光受体基团; 级联FRET适配体传感器的制备方法包括以下步骤: 步骤1分别合成供体聚合物纳米粒子和受体聚合物纳米粒子,供体聚合物纳米粒子和受体聚合物纳米粒子负载不同荧光染料; 步骤2在供体聚合物纳米粒子上修饰OTA适配体,在受体聚合物纳米粒子上修饰cDNA和受体荧光基团; 步骤3将步骤2的供体聚合物纳米粒子和受体聚合物纳米粒子通过DNA杂交实现交联,从而得到用于赭曲霉毒素A检测的级联FRET适配体传感器; 所述步骤1中: 供体聚合物纳米粒子和受体聚合物纳米粒子的外壳均为叠氮羧酸双官能团修饰的PMMA-AspN3; 供体聚合物纳米粒子内部包裹的染料为发射波长在500-540nm的绿色阳离子染料与反离子的复合物;受体聚合物纳米粒子内部包裹的染料为激发波长在500-540nm、发射波长在545-600nm的黄色阳离子染料与反离子的复合物; 所述绿色阳离子染料包括罗丹明110、罗丹明Green、罗丹明123中的一种;所述黄色阳离子染料包括罗丹明R18、TAMRA中的一种;所述反离子包括四苯基硼酸酯及其氟化类似物;所述四苯基硼酸酯的氟化类似物包括F5-TPB、F12-TPB; 所述步骤2具体为: 在供体聚合物纳米粒子上修饰OTA适配体的方法为:将ssDNA与供体聚合物纳米粒子混合后,在25-50℃温度下不搅拌避光反应5-24h,降至室温; 在受体聚合物纳米粒子上修饰cDNA和受体荧光基团的方法为:将修饰有DBCO基团的ssDNA、红色荧光染料与受体聚合物纳米粒子混合后,在25-50℃温度下不搅拌避光反应5-24h,降至室温; 所述供体聚合物纳米粒子上修饰的ssDNA包括封闭DNA和OTA适配体,其中封闭DNA与OTA适配体比例为120:1-60:1之间; 所述受体聚合物纳米粒子上修饰的ssDNA包括封闭DNA和cDNA,其中封闭DNA与cDNA比例为60:1-20:3之间; 所述受体聚合物纳米粒子上修饰的受体荧光基团为荧光发射610nm的红色荧光染料,包括Cy5-DBCO、ATTO647N-DBCO、ATTO665-DBCO或Cy5.5-DBCO,修饰的受体荧光基团的量为每个受体聚合物纳米粒子上修饰1-60个。
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