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龙图腾网获悉深圳细胞谷生物医药有限公司申请的专利无电转、批量制备免疫细胞治疗产品的方法及其产品获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120866421B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-03发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511399093.4，技术领域涉及：C12N15/867；该发明授权无电转、批量制备免疫细胞治疗产品的方法及其产品是由王建勋;史渊源;柴瑞楷;赵丽君设计研发完成，并于2025-09-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本无电转、批量制备免疫细胞治疗产品的方法及其产品在说明书摘要公布了：本发明提供无电转、批量制备免疫细胞治疗产品的方法，所述免疫细胞自身的CD7基因被敲除和同时表达靶向CD7的嵌合抗原受体，所述方法包括通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒，使用工程化类病毒颗粒敲除免疫细胞中CD7基因，使用CD7CAR逆转录病毒载体转导免疫细胞，从而得到所述免疫细胞治疗产品。本发明针对当前CAR‑T细胞制备中CRISPR应用电转技术存在成本高，普及性差，失败风险高的难点，引入eVLP技术进行高效便捷的基因编辑，安全保证、节约成本、降低操作复杂度，同时大大提高了免疫细胞制备成功的机率。基于临床需求，本发明使用CD7eVLP载体结合CD7CAR的逆转录病毒共同构建了CD7KO+CD7CART的细胞治疗产品。

本发明授权无电转、批量制备免疫细胞治疗产品的方法及其产品在权利要求书中公布了：1.无电转、批量制备自身的CD7基因被敲除和同时表达靶向CD7的嵌合抗原受体的免疫细胞治疗产品的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 步骤1：通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒，所述稳定细胞系通过无电转方法制备； 步骤2：使用步骤1的工程化类病毒颗粒敲除免疫细胞中CD7基因，得到敲除CD7基因的免疫细胞； 步骤3：通过细胞工厂的方法生产CD7CAR逆转录病毒载体，然后转导步骤2得到的免疫细胞，从而得到所述免疫细胞治疗产品； 步骤1中工程化类病毒颗粒通过以下方法制备： 步骤11：构建BaEV逆转录病毒稳定包装细胞系，包括将构建逆转录病毒制备所需的结构蛋白gag-pol蛋白转进HEK293T细胞系或其衍生细胞系，得到相应含结构蛋白gag-pol蛋白的细胞系；在所述含结构蛋白gag-pol蛋白的细胞系基础上，构建同时敲除ASCT-1和ASCT-2受体蛋白的HEK293T细胞系或其衍生细胞系，得到相应敲除ASCT-1和ASCT-2受体蛋白的细胞系；将BaEV包膜转入上述敲除ASCT-1和ASCT-2受体蛋白的细胞系，从而得到所述BaEV逆转录病毒稳定包装细胞系； 步骤12：将含Gag-Cas9的质粒转染步骤1得到的所述BaEV逆转录病毒稳定包装细胞系，筛选得到能够生产包含BaEV包膜糖蛋白、gag-pol蛋白和Cas9蛋白的工程化类病毒颗粒的细胞系，所述含Gag-Cas9的质粒是以pCMV-MMLVgag-3xNES-Cas9作为骨架，通过无缝克隆方法在Cas9-PolyA后面添加hPGK启动子与BSD抗性基因元件构建制备得到的pCMV-MMLVgag-3xNES-Cas9-PolyA-hPGK-BSD； 步骤13：构建用于逆转录病毒包装系统的自失活递送质粒，该自失活递送质粒包括靶向不同靶点gRNA元件；该自失活递送质粒转染293T细胞或Ampho293细胞，然后通过该转染后细胞生产自失活靶向不同靶点的逆转录病毒； 步骤14：使用步骤13得到的逆转录病毒转导步骤12得到的细胞系，从中筛选得到生产工程化类病毒颗粒的稳定细胞系，从而通过稳定细胞系生产工程化类病毒颗粒； 在步骤12中，通过药筛以及有限稀释法挑选出单克隆细胞株，提取其基因组DNA并通过检测细胞基因组中Cas9基因和Pol基因分子的拷贝数，计算Cas9基因Pol基因的比值以及Pol基因内参基因的比值，用于筛选得到步骤2中的细胞系，所述Cas9基因Pol基因的比值在0.4-1.2之间，所述内参基因是RPPH，Pol基因内参基因的比值0.7； 步骤13中的所述自失活递送质粒包括修饰的LTR结构，该结构包含5'LTR和经过ΔU3修饰的3'LTR，使得病毒基因组整合入宿主细胞后，ΔU3修饰的3'LTR转移至5'端会导致启动子功能失活，从而阻断完整5'LTR-3'LTR结构的再生成，防止递送质粒被重新包装。

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