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龙图腾网获悉南京师范大学申请的专利一种基于蛋白质固有荧光非标记检测谷物中的黄曲霉毒素B1的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115524493B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210549739.2，技术领域涉及：G01N33/577；该发明授权一种基于蛋白质固有荧光非标记检测谷物中的黄曲霉毒素B1的方法是由李建林;代士杰;李前进;窦梦华;徐瑞敏设计研发完成，并于2022-05-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于蛋白质固有荧光非标记检测谷物中的黄曲霉毒素B1的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于蛋白质固有荧光非标记检测谷物中的黄曲霉毒素B1的方法，所述方法利用纳米金颗粒增强光子晶体微球表面人工抗原黄曲霉毒素B1‑牛血清蛋白固有荧光的机理，在纳米金颗粒表面固定黄曲霉毒素B1单克隆抗体，在光子晶体微球表面固定有人工抗原黄曲霉毒素B1‑BSA，当黄曲霉毒素B1标准品或样品提取液与修饰有上述生物分子的纳米金颗粒及光子晶体微球一起孵育后，检测光子晶体微球的荧光信号，根据微球的荧光信号进行定性定量检测样品中黄曲霉毒素B1。本发明能够灵敏的、特异性的检测样品中的黄曲霉毒素B1，降低检测成本。

本发明授权一种基于蛋白质固有荧光非标记检测谷物中的黄曲霉毒素B1的方法在权利要求书中公布了：1.一种基于蛋白质固有荧光非标记检测谷物中的黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括如下步骤： 在纳米金颗粒表面固定黄曲霉毒素B1单克隆抗体，在光子晶体微球表面固定人工抗原黄曲霉毒素B1-BSA，当黄曲霉毒素B1标准品或样品提取液与上述纳米金颗粒及光子晶体微球一起孵育后，在360-370nm激发光波长下检测光子晶体微球的荧光信号，根据微球的荧光信号进行定性或定量检测样品中黄曲霉毒素B1； 所述光子晶体微球通过二氧化硅乳液和甲基硅油自组装形成，所述二氧化硅乳液由TEOS和氨水制成； 所述光子晶体微球表面固定人工抗原黄曲霉毒素B1-BSA由光子晶体微球修饰羟基和环氧基后，加入AFB1-BSA，震荡反应得到； 所述纳米金颗粒表面固定黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备： 1制备胶体金溶液 取50mL纯净水进行加热和搅拌操作，等到水沸腾，将配置好的质量分数1％柠檬酸三钠溶液取0.375mL和0.5mL2%HAuCl4溶液一起加入，加热至胶体金呈现透明的紫红色，停止加热，冷却胶体金溶液至室温，待用； 2修饰基团 配置10μmolL巯基-聚乙二醇-羧基溶液和50μmolL甲氧基-聚乙二醇-巯基溶液，取22.5mL制备好的胶体金溶液，先加入0.75mL巯基-聚乙二醇-羧基溶液，室温下以160rpm的转速震荡反应20min，反应结束后，再加入5mL甲氧基-聚乙二醇-巯基溶液，室温下以160rpm的转速震荡反应3h，反应结束后，离心3-4次，除去残留的PEG，取下层沉淀，最后使用pH6.8的PB缓冲液将胶体金溶液定容到1mL，收集待用； 3活化基团 使用pH7.4的PB缓冲液分别配置40mgmLEDC和110mgmLNHS溶液，用作活化羧基的活化剂，将步骤2已经修饰好羧基的胶体金溶液1mL中分别加入6μLEDC和6μLNHS溶液，室温下以160rpm的转速震荡反应20min左右，反应结束后使用pH7.4的PB缓冲液清洗3-4次以除去多余的EDC和NHS溶液，取下层沉淀，使用PB缓冲液将胶体金溶液定容到1mL； 4取100μL，100μgmL单克隆抗体AFB1-ab加入150μL上述步骤3得到的胶体金溶液中，4°C摇床震荡2h，在10000g离心30min后，用PB缓冲液洗涤3次，取固体沉淀，用150μLPB缓冲液重新悬浮纳米金颗粒得到纳米金颗粒表面固定黄曲霉毒素B1单克隆抗体； 所述纳米金颗粒大小38nm，所述孵育为在35-37℃孵育时间90-100min；每个样品仅需要2μL；所述方法利用表面固定黄曲霉毒素B1单克隆抗体的纳米金颗粒增强光子晶体微球表面人工抗原黄曲霉毒素B1-BSA固有荧光实现检测。

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