山东滨州博莱威生物技术有限公司张飞获国家专利权
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龙图腾网获悉山东滨州博莱威生物技术有限公司申请的专利一种鸡鼻气管鸟杆菌(A型)亚单位疫苗及其制备方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118267457B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-06发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410044247.7,技术领域涉及:A61K39/02;该发明授权一种鸡鼻气管鸟杆菌(A型)亚单位疫苗及其制备方法和应用是由张飞;韩强;朱杰;耿兴良设计研发完成,并于2024-01-12向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种鸡鼻气管鸟杆菌(A型)亚单位疫苗及其制备方法和应用在说明书摘要公布了:本发明属于基因工程疫苗技术领域,具体涉及一种鸡鼻气管鸟杆菌A型亚单位疫苗及其制备方法和应用。所述亚单位疫苗包括OMA87蛋白,大小为97.15kD,基因序列如SEQ.ID.NO.4所示,氨基酸序列如SEQ.ID.NO.5所示。经诱导表达后,对OMA87蛋白进行了纯化及脱毒,获得了纯度在50%以上,内毒素含量在2500EUmL以下的半成品抗原。使用白油佐剂,经过乳化配制了合格的OMA87蛋白亚单位疫苗,即为鸡鼻气管鸟杆菌亚单位疫苗。该疫苗免疫肉鸡及蛋鸡,都具有良好的安全性,且产生的抗体水平较高持续期长,为肉鸡及蛋鸡预防鸡鼻气管鸟杆菌侵染提供了一种方法。
本发明授权一种鸡鼻气管鸟杆菌(A型)亚单位疫苗及其制备方法和应用在权利要求书中公布了:1.一种鸡鼻气管鸟杆菌A型亚单位疫苗,其特征在于,所述亚单位疫苗包括OMA87蛋白,大小为97.15kD,基因序列如SEQIDNO.4所示,氨基酸序列如SEQIDNO.5所示; 所述OMA87蛋白表达方式为原核表达,表达载体为pET28a,原核表达诱导剂为IPTG,温度为37℃,诱导时间为5h; 所述的鸡鼻气管鸟杆菌A型亚单位疫苗经以下步骤制得: 1获得ORT分离株,进行血清型鉴定,得到的ORT分离株含有如SEQIDNO.3所示的基因序列,用于扩增如SEQIDNO.3所示的基因序列的引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示;所述ORT分离株于2023年11月15日保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCCNo:M20232159; 2以所述ORT分离株的基因组为模板,进行PCR反应,扩增OMA87基因,并通过基因重组将该基因插入pET28a原核表达质粒中,转化BL21感受态细胞,获得OMA87蛋白原核表达菌株; 3利用步骤2中获得的OMA87蛋白原核表达菌株原核表达OMA87蛋白,采用westernblot鉴定该蛋白的反应原性,并通过硫酸铵沉淀结合Triton-114脱毒,得到内毒素含量小于2500EUmL且蛋白纯度在50%以上的半成品抗原; 4将所述半成品抗原与Tween-80混合作为水相,再与白油佐剂混合进行乳化,即得鸡鼻气管鸟杆菌A型亚单位疫苗; 在步骤2中,所述扩增OMA87基因的具体步骤为: S1、将获得的ORT分离株进行复苏,用纯化水清洗平板并收集菌体,沸水煮5min后以7000rpm离心5min,分出上清液,即为DNA模板; S2、利用序列如SEQIDNO.6和SEQIDNO.7所示的PCR扩增引物进行PCR扩增,得到核苷酸序列如SEQIDNO.4所示、氨基酸序列如SEQIDNO.5所示的OMA87基因。
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