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龙图腾网获悉江苏硕世生物科技股份有限公司申请的专利一种PCR长扩增子的二代测序文库构建方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120099141B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510297729.8，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种PCR长扩增子的二代测序文库构建方法及应用是由聂自豪;张蓉;王瑶;张乐;陈永红;郭玉婉;周国辉;刘中华;王国强设计研发完成，并于2025-03-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种PCR长扩增子的二代测序文库构建方法及应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种PCR长扩增子的二代测序文库构建方法，包括：使用引物对靶标序列进行PCR扩增，得到PCR长扩增子；经过混合酶体系进行消化和片段化，并进行末端修复加A，混合酶体系包括ExoI酶、UDG酶和TaqDNA聚合酶；将加A产物进行测序接头的连接，得到“接头—DNA插入片段—接头”形式的接头连接产物；进行第一轮纯化处理，得到二代测序文库，可直接用于上机，也可经过进一步的PCR扩增富集文库后再进行上机。本发明可快速构建用于二代测序平台的PCR长扩增子文库，操作简便，适于规模化应用，采用UDG酶和dUTP来对PCR长扩增子进行打断，不需要特定的酶切识别位点，随机性更好。

本发明授权一种PCR长扩增子的二代测序文库构建方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种PCR长扩增子的二代测序文库构建方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、PCR扩增：使用引物对靶标序列进行PCR扩增，得到PCR长扩增子； S2、将PCR长扩增子经过混合酶体系进行消化和片段化，并进行末端修复加A；所述混合酶体系中包括ExoI酶、UDG酶和TaqDNA聚合酶； S3、将加A产物进行测序接头的连接，得到接头连接产物； S4、纯化接头连接产物：将接头连接产物进行第一轮纯化处理； 步骤S1中，进行PCR扩增时，PCR反应体系中包括：引物、dNTPs、DNA聚合酶、模板DNA；所述PCR反应体系中还包括UDG酶；所述UDG酶的用量为0.1~2U； 在进行PCR扩增反应程序的变性、退火和延伸前，先在37℃条件下孵育； 步骤S2中，构建消化、片段化以及末端修复加A的反应体系时，加入的ExoI酶的用量为5~40U，加入的UDG酶的用量为0.1~2U；并补充dATP，反应体系中dATP的浓度为0.1~0.4mM； 步骤S2的反应程序包括： S21：37℃5~20min，1个循环； S22：80℃10~20min，1个循环； S23：65℃10~30min，1个循环。

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