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龙图腾网获悉郑州大学申请的专利一种内标辅助花瓣状SERS纳米探针及其制备方法、应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115219429B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211023571.8，技术领域涉及：G01N21/01；该发明授权一种内标辅助花瓣状SERS纳米探针及其制备方法、应用是由陈胜;吕梦雅;范嘉怡;张文婷;张书胜设计研发完成，并于2022-08-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种内标辅助花瓣状SERS纳米探针及其制备方法、应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种内标辅助花瓣状SERS纳米探针及其制备方法、应用，其中，本发明的内标辅助花瓣状SERS纳米探针是由金纳米球内核、内标修饰分子、花瓣状金纳米外壳和识别分子4‑硝基苯硫酚构成的核‑分子‑壳结构的金纳米花探针；内标修饰分子是具有腈基、炔基或叠氮官能团的拉曼信号分子。本发明以拉曼信号分子作为内标修饰分子修饰在金纳米球内核上，校正后的工作曲线重现性好，误差小，提高了检测结果的可靠性；通过内标修饰分子的分子层上生长一层花瓣状金纳米外壳提高了SERS基底内部和外部的SERS活性，并且花瓣状外壳增加了SERS基底的表面积。另外，本发明的识别分子能够实现硫化氢的比率拉曼检测，有效降低背景信号的干扰，提高了检测灵敏度。

本发明授权一种内标辅助花瓣状SERS纳米探针及其制备方法、应用在权利要求书中公布了：1.内标辅助花瓣状SERS纳米探针在以非疾病诊断为目的的活细胞内H2S成像和定量分析中的应用，其中，所述内标辅助花瓣状SERS纳米探针由金纳米球内核、内标修饰分子、花瓣状金纳米外壳和识别分子构成的核-分子-壳结构的金纳米花探针； 其中，所述金纳米球内核的粒径为20～40nm；所述花瓣状金纳米外壳的厚度为30～50nm，所述内标修饰分子为4-巯基苯甲腈，所述识别分子为4-硝基苯硫酚； 所述内标辅助花瓣状SERS纳米探针包括以下制备步骤： 第一步，制备具有表面等离激元共振效应的金纳米球内核AuNPs S11，利用经典柠檬酸钠还原法制备金种子； S12，采用种子生长法制备金纳米内核AuNPs，其中AuNPs溶液为酒红色，AuNPs溶液中AuNPs的粒径约为30nm； 第二步，在金纳米球内核AuNPs上修饰4-巯基苯甲腈：将AuNPs溶液的pH调节至9.0，加入20mM4-巯基苯甲腈的乙醇溶液，30℃恒温搅拌3h，离心去除未键合的4-巯基苯甲腈，用去离子水将沉淀重新分散得到4-巯基苯甲腈修饰的AuNPs溶液； 第三步，在内标修饰分子的分子层外生长一层花瓣状金纳米外壳，获得含有内标修饰分子掺杂的金纳米花，将其作为SERS基底：将4-巯基苯甲腈修饰的AuNPs与十六烷基三甲基氯化铵溶液混合，然后依次加入HAuCl4·3H2O和抗坏血酸，反应结束后得到深蓝色的SERS基底——Au@MPBN@AuNFs溶液； 第四步，将Au@MPBN@AuNFs溶液离心，用去离子水洗涤沉淀；洗涤后加入对4-硝基苯硫酚，室温下搅拌反应，反应结束后离心，将沉淀分散于HEPES缓冲液即得4-NTP修饰的内标辅助花瓣状SERS纳米探针——Au@MPBN@Au@4-NTP； 细胞中H2S的检测包括以下内容：将贴壁生长24h后的细胞接种至DMEM培养基中，加入不同浓度的NaHS溶液共同孵育，孵育结束后用PBS缓冲液洗涤；再加入含有Au@MPBN@Au@4-NTP的DMEM培养基，恒温孵育，孵育结束后用PBS缓冲液洗涤，进行拉曼检测，得到细胞外源性H2S成像图片和拉曼峰；以SERS强度比I1139I2223或I1329I2223作为横坐标，以NaHS溶液的浓度的对数值作为横坐标，绘制标准曲线；根据比率拉曼成像图及标准曲线I1139I2223对细胞样本中的H2S半定量分析； 活细胞内H2S成像包括细胞内源性H2S成像和细胞外源性H2S成像，细胞外源性H2S成像包括以下内容：将贴壁生长24h后的细胞样本接种至DMEM培养基中，加入NaHS溶液共同孵育，孵育结束后用PBS缓冲液洗涤；再加入含有Au@MPBN@Au@4-NTP的DMEM培养基，恒温孵育，孵育结束后用PBS缓冲液洗涤，进行拉曼检测，得到细胞外源性H2S成像图片；细胞内源性H2S成像包括以下内容：将贴壁生长24h后的细胞样本接种至DMEM培养基中，加入硝普钠溶液孵育，利用硝普钠刺激细胞生产内源性H2S；孵育结束后用PBS缓冲液洗涤；再加入含有Au@MPBN@Au@4-NTP的DMEM培养基，恒温孵育，孵育结束后用PBS缓冲液洗涤，进行拉曼检测，得到细胞内源性H2S成像图片。

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