东亚DKK株式会社八幡悟史获国家专利权
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龙图腾网获悉东亚DKK株式会社申请的专利内毒素的测定方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115433761B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-20发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210600211.3,技术领域涉及:C12Q1/56;该发明授权内毒素的测定方法是由八幡悟史;小田侑;宫尾优香;下村亚依设计研发完成,并于2022-05-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本内毒素的测定方法在说明书摘要公布了:本发明目的在于提供一种用于更高精度地测定透析液的内毒素浓度的方法,其使用由水制作的校准曲线,及用于该方法的试剂盒。本发明提供的内毒素的测定方法如下所述:将规定量的被测试样与含溶解物试剂的干燥粉末混合来制备第一反应溶液,然后将该第一反应溶液以规定时间进行温育后,在避光下,将所述第一反应溶液与含荧光素酶生物发光试剂的干燥粉末混合来制备第二反应溶液,并测定该第二反应溶液的发光量,根据所述发光量测定所述被测试样的内毒素浓度,所述被测试样为透析液或水,所述第二反应溶液的钠离子浓度为250~390mM,钙离子浓度为0.5~10mM,氯化物离子浓度为250~361.5mM,以及Tris浓度为20~30mM。
本发明授权内毒素的测定方法在权利要求书中公布了:1.一种内毒素的测定方法,其是测定内毒素的方法,具有以下步骤: 溶解物反应步骤,其将规定量的被测试样与含溶解物试剂的干燥粉末混合来制备第一反应溶液,然后将该第一反应溶液以规定时间进行温育; 荧光素酶反应步骤,其在所述溶解物反应步骤后,在避光下,将所述第一反应溶液与含荧光素酶生物发光试剂的干燥粉末混合来制备第二反应溶液,并测定该第二反应溶液的发光量;以及 内毒素测定步骤,其根据所述荧光素酶反应步骤中得到的发光量,测定所述被测试样的内毒素浓度, 所述被测试样为透析液或水, 所述溶解物试剂含有C因子、B因子和前凝固酶, 所述荧光素酶生物发光试剂含有发光合成基质、抗盐性荧光素酶和ATP, 所述发光合成基质是通过被活性C因子、活性B因子或由所述前凝固酶的转化得到的凝固酶消化而使发光基质游离的物质, 在所述荧光素酶反应步骤中,所述第二反应溶液的钠离子浓度为250~390mM,钙离子浓度为0.5~10mM,氯化物离子浓度为250~361.5mM,以及Tris浓度为20~30mM; 其中,所述抗盐性荧光素酶是来源于甲虫的野生型荧光素酶的突变体,在编码野生型甲虫荧光素酶的氨基酸序列中,至少具有选自下述a、b、c和d中一种以上的突变的突变型甲虫荧光素酶: a与野生型北美萤火虫荧光素酶的氨基酸序列中的第288位缬氨酸相对应的氨基酸突变为异亮氨酸、亮氨酸或苯丙氨酸; b与野生型北美萤火虫荧光素酶的氨基酸序列中的第376位亮氨酸相对应的氨基酸突变为脯氨酸; c与野生型北美萤火虫荧光素酶的氨基酸序列中的第455位谷氨酸相对应的氨基酸突变为缬氨酸、丙氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸; d与野生型北美萤火虫荧光素酶的氨基酸序列中的第488位谷氨酸相对应的氨基酸突变为缬氨酸、丙氨酸、丝氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸。
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