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首都医科大学附属北京儿童医院;北京市儿科研究所;悦康药业集团股份有限公司于丹获国家专利权

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龙图腾网获悉首都医科大学附属北京儿童医院;北京市儿科研究所;悦康药业集团股份有限公司申请的专利一种靶向病毒DNA筛选抗病毒靶点的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119846231B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-20发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510058277.8,技术领域涉及:G01N33/68;该发明授权一种靶向病毒DNA筛选抗病毒靶点的方法是由于丹;卢璐;范淼;王心玉;苏文;姚开虎;宋更申设计研发完成,并于2025-01-14向国家知识产权局提交的专利申请。

一种靶向病毒DNA筛选抗病毒靶点的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种靶向病毒DNA筛选抗病毒靶点的方法,分别获得了靶向水痘带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ型和卡波西肉瘤相关疱疹病毒关键DNA区域的有效sgRNA序列;共转染含有病毒DNA的质粒及dCas9‑sgRNA,分别免疫沉淀富集靶向水痘带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ型以及卡波西肉瘤相关疱疹病毒的DNA筛选调控病毒复制的蛋白;质谱鉴定蛋白,并验证了该方法也适用于靶向艾滋病病毒的DNA筛选调控病毒复制的蛋白,从而建立了靶向病毒DNA筛选调控病毒复制蛋白的方法。

本发明授权一种靶向病毒DNA筛选抗病毒靶点的方法在权利要求书中公布了:1.一种靶向病毒DNA筛选调控病毒复制的蛋白的方法,其特征在于,所述病毒为水痘带状疱疹病毒VZV,所述方法包括如下步骤: 1转染样本 在293T细胞中转染带有VZVORF4启动子区域的质粒,以及作为阴性对照组的空载体和dCas9-sgRNA池,所述dCas9-sgRNA池由SEQIDNO.3、SEQIDNO.7和SEQIDNO.10的sgRNA序列组成; 2细胞交联 每个样本有15cm-dish细胞共计8盘,转染48小时后,使用1%无甲醇甲醛固定细胞15min;加入甘氨酸反应5min后弃掉上清,使用预冷的磷酸缓冲盐溶液PBS漂洗细胞两遍; 3细胞裂解 每个盘加入2mL含有蛋白酶抑制剂的PBS收集细胞,1600rpm离心收集细胞后加入含有蛋白酶抑制剂和二硫苏糖醇DTT的十二烷基磺酸钠SDS裂解液重悬细胞使之均匀,冰上进行充分裂解; 4超声获得DNA片段 利用超声仪器打断DNA获得大小在200bp到1000bp之间的DNA片段;15000rpm反复离心至少3次后,取1mL片段化的DNA稀释至3mL; 5预处理去除非特异性结合 使用蛋白A琼脂糖珠proteinAbeads预处理,与样本孵育2小时,减少非特异性结合; 6免疫共沉淀 弃掉蛋白A琼脂糖珠proteinAbeads后再加入琼脂糖珠Flagbeads11μL,4℃孵育过夜; 7漂洗除杂获得待鉴定蛋白产物 将带有DNA互作产物的琼脂糖珠Flagbeads用漂洗液反复洗涤,漂洗顺序低盐缓冲液11min一次,高盐缓冲液5min一次,低盐缓冲液11min两次,缓冲液TE5min两次,最后用PBS洗涤三遍,以上均在摇床上低速摇洗,获得待鉴定蛋白产物,质谱鉴定样本直接冻存于-80℃冰箱,所述的低盐缓冲液为:0.1%十二烷基硫酸钠、1%曲拉通X-100、2mM乙二胺四乙酸、20mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、150mM氯化钠,所述的高盐缓冲液为:0.1%十二烷基硫酸钠、1%曲拉通X-100、2mM乙二胺四乙酸、20mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、300mM氯化钠;所述的缓冲液TE为:10mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、1mM乙二胺四乙酸; 8对待鉴定蛋白产物进行质谱鉴定分析。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人首都医科大学附属北京儿童医院;北京市儿科研究所;悦康药业集团股份有限公司,其通讯地址为:100033 北京市西城区南礼士路56号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

以上内容由龙图腾AI智能生成。

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