山东大学韩秋菊获国家专利权
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龙图腾网获悉山东大学申请的专利一种提高NK细胞效应功能的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120829931B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-20发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511059400.4,技术领域涉及:C12N15/86;该发明授权一种提高NK细胞效应功能的方法是由韩秋菊;王新宇;张建;李蓉晖;郑义;赵华俊设计研发完成,并于2025-07-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种提高NK细胞效应功能的方法在说明书摘要公布了:本发明属于免疫治疗技术领域,具体涉及一种提高NK细胞效应功能的方法,本发明通过构建PKM2基因的点突变载体PKM2‑322K‑R和PKM2‑433K‑R,影响糖酵解代谢过程,减少乳酸的产生从而抑制乳酸化修饰水平。本发明还提供了一种PKM2蛋白的NK92MI细胞的构建方法,步骤包括构建载体、提质粒、包装浓缩病毒、转染目的细胞。本发明靶向乳酸化修饰这一蛋白质修饰,阻断乳酸化修饰从而逆转NK细胞的功能耗竭,通过点突变使PKM2去乳酸化能够部分逆转NK细胞功能,恢复NK92MI细胞的效应分子的表达水平。
本发明授权一种提高NK细胞效应功能的方法在权利要求书中公布了:1.一种PKM2蛋白的NK92MI细胞的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括以下步骤: 1构建含有PKM2基因的点突变载体PKM2-322K-R或PKM2-433K-R质粒的菌种;所述PKM2-322K-R的编码核酸为SEQIDNO:1;所述PKM2-433K-R的编码核酸为SEQIDNO:2; 2提质粒:将含有PKM2-322K-R或PKM2-433K-R质粒的菌种接种于含有氨苄抗性的固体培养基中,于37°C培养箱中培养12h,挑取一个单克隆菌落,转移到LB液体培养基中,置于摇床上进行震荡,得到菌液,随后使用无内毒素质粒提取试剂盒提取质粒,并测定质粒纯度和浓度; 3包装、浓缩病毒:将步骤2得到的PKM2-322K-R或PKM2-433K-R质粒使用293T细胞进行包装,收集293T细胞的培养上清后过滤,随后加入4×PEG8000,于摇床翻转,离心,使用1×PBS重悬下层沉淀,加入1000×鱼精蛋白以及BX795,得到浓缩后的病毒; 4转染目的细胞:将步骤3中得到的浓缩后的病毒加入到NK92MI细胞培养上清中病毒体积为培养上清的1100;8h后换液,得到转染目的质粒的NK92MI细胞。
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