中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)单同领获国家专利权
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龙图腾网获悉中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)申请的专利一种过表达RNMT基因的试剂在促进病毒感染中的应用及重组LLC-PK1细胞系获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120888574B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-20发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511069240.1,技术领域涉及:C12N15/54;该发明授权一种过表达RNMT基因的试剂在促进病毒感染中的应用及重组LLC-PK1细胞系是由单同领;孔宁;刘于畅;童光志;秦文珍;杨心雨;童武;郑浩;于海设计研发完成,并于2025-07-31向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种过表达RNMT基因的试剂在促进病毒感染中的应用及重组LLC-PK1细胞系在说明书摘要公布了:本发明提供了一种过表达RNMT基因的试剂在促进病毒感染中的应用及其构建的重组LLC‑PK1细胞系,属于基因工程技术领域。本发明提供通过将RNMT片段克隆到慢病毒载体中构建出重组慢病毒质粒,再经病毒拯救包装出的慢病毒,感染LLC‑PK1细胞,获得表达RNMT的重组LLC‑PK1细胞系。稳定表达RNMT的重组LLC‑PK1细胞会促进PEDV子代病毒生成,这为研究病毒致病机制提供了工具,为后续制备病毒感染细胞模型提供了基础。
本发明授权一种过表达RNMT基因的试剂在促进病毒感染中的应用及重组LLC-PK1细胞系在权利要求书中公布了:1.稳定表达RNMT的重组LLC-PK1细胞系在制备猪流行性腹泻病毒感染细胞模型中的应用,所述应用为提高猪流行性腹泻病毒感染性,包括促进猪流行性腹泻病毒感染基因复制和子代病毒复制水平,所述稳定表达RNMT的重组LLC-PK1细胞系的构建方法包括以下步骤: 1构建过表达RNMT基因的重组慢病毒质粒,所述RNMT基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示,氨基酸序列如SEQIDNO:2所示; 2将步骤1中所述过表达RNMT基因的重组慢病毒质粒和辅助质粒共同转染细胞拯救得到过表达RNMT重组慢病毒; 3将拯救得到的重组慢病毒感染LLC-PK1细胞,经筛选得到稳定表达RNMT的重组LLC-PK1细胞系; 其中,步骤1中所述构建方法,用含BamHI酶切位点的引物扩增RNMT基因,得到的扩增片段和慢病毒载体pLOVCMV经BamHI酶切,酶切片段和线性化载体连接,鉴定,得到过表达RNMT基因的重组慢病毒质粒;所述含BamHI酶切位点的引物包括核苷酸序列如SEQIDNO:3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQIDNO:4所示的反向引物; 所述步骤2中共同转染细胞包括质量份的组分:4份重组慢病毒质粒、3份psPAX2辅助质粒、1份pMD2.G辅助质粒; 所述共同转染细胞时转染试剂为Lipofectamine3000; 其中以HEK293T细胞作为侵染细胞; 所述过表达RNMT重组慢病毒的拯救用3μgmL嘌呤霉素筛选。
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