西部(重庆)科学城种质创制大科学中心;西南大学徐红艳获国家专利权
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龙图腾网获悉西部(重庆)科学城种质创制大科学中心;西南大学申请的专利一种中华鳖卵巢颗粒细胞分离及培养方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121294331B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-24发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511882901.2,技术领域涉及:C12N5/071;该发明授权一种中华鳖卵巢颗粒细胞分离及培养方法是由徐红艳;唐娜设计研发完成,并于2025-12-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种中华鳖卵巢颗粒细胞分离及培养方法在说明书摘要公布了:一种中华鳖卵巢颗粒细胞分离及培养方法,包括分离和培养,所述分离是将选择正值产卵期的雌性中华鳖个体,麻醉后断颈处死,分离卵巢组织,清洗后剔除多余部分,在置于基础培养基中分离II‑III期卵泡,保持卵泡完整性,进行酶消化处理,然后离心去除上清,获得含有直径为0.1‑0.5cm卵粒的沉淀,采用混合培养基重悬沉淀,接种培养。本发明提供的分离方法分离获得的卵巢颗粒细胞得率高,在特定的混合培养基培养卵巢颗粒细胞的方法,可替代因子多样,且添加因子量少,同时使用无NaHCO3培养基,减少CO2的使用,并保持获得卵巢颗粒细胞与机体内环境一致,不仅降低了成本,还增加了卵巢颗粒细胞的体外生存期。
本发明授权一种中华鳖卵巢颗粒细胞分离及培养方法在权利要求书中公布了:1.一种中华鳖卵巢颗粒细胞分离及培养方法,包括分离和培养,其特征在于:所述分离是选择正值产卵期的雌性中华鳖个体,麻醉后断颈处死,分离卵巢组织,清洗后剔除多余部分,再置于基础培养基中分离II-III期卵泡,保持卵泡完整性,进行酶消化处理,然后离心去除上清,获得含有直径为0.1-0.5cm卵粒的沉淀,采用混合培养基重悬沉淀,接种培养,所述酶消化是先采用浓度为0.8~1.5mgmL的胶原酶IV进行第一步酶消化,消化时间为18~22min,然后采用浓度为1mgmL的胶原酶IV和质量浓度为0.25%的胰蛋白酶按照体积比为1:1组成的复合酶进行第二步酶消化,消化时间为8~12min;所述基础培养基是无NaHCO3的DMEM培养基,所述混合培养基是在上述基础培养基中加入15%胎牛血清,1×Pen-Strep,0.8~1.2%中华鳖血清和生长因子,所述生长因子为8~12ngmLIGF-1或EGF。
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