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龙图腾网获悉北京五加和基因科技有限公司;北京锦篮基因科技有限公司申请的专利重组腺相关病毒载体制品中rcAAV含量测定方法及检测试剂盒获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116004921B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-31发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211723118.8，技术领域涉及：C12Q1/70；该发明授权重组腺相关病毒载体制品中rcAAV含量测定方法及检测试剂盒是由李秀;牛苗;王玉松;潘显辉设计研发完成，并于2022-12-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本重组腺相关病毒载体制品中rcAAV含量测定方法及检测试剂盒在说明书摘要公布了：本发明涉及重组腺相关病毒载体样品中rcAAV含量的检测方法，所述方法的特征在于：使用4至5mL容量的细胞培养瓶培养细胞并在不损失rcAAV的情形下对细胞进行三轮或以上感染，然后使用SEQIDNO:1和2所示的rep2基因特异性引物和SEQIDNO:3所示的Taqman探针对第一轮和最后一轮的感染收获的超滤浓缩液实施定量PCR检测，由此获得重组腺相关病毒载体样品中rcAAV含量。本发明还涉及用于实施本发明的重组腺相关病毒载体样品中rcAAV含量的检测方法的试剂盒。

本发明授权重组腺相关病毒载体制品中rcAAV含量测定方法及检测试剂盒在权利要求书中公布了：1.重组腺相关病毒9载体样品中的rcAAV9含量检测方法，包括如下步骤： 1将对数生长期的HEK293细胞以1.2E+6个细胞瓶接种于T25细胞培养瓶中，在4mL含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养过夜； 2将以下各组接种物加入至各2瓶所述细胞培养瓶中，进行HEK-293细胞的第一轮感染： i阳性对照组：为辅助病毒和rcAAV9标准品，其中，辅助病毒用于rcAAV9标准品的复制，且rcAAV9标准品为2E+4vg至1E+5vgrcAAV9，所述辅助病毒是腺病毒； ii加标组：为辅助病毒和rcAAV9标准品，以及受检样品，其中，辅助病毒用于rcAAV9标准品的复制，且rcAAV9标准品为2E+4vg至1E+5vgrcAAV9；受检样品为1E+11vgrAAV9，所述辅助病毒是腺病毒； iii受检样品组：为辅助病毒和受检样品，其中，受检样品为1E+11vgrAAV9，所述辅助病毒是腺病毒； 3第一轮感染结束后，将各组的2瓶所述培养瓶中的细胞及上清冻融，并将各培养瓶中的全部细胞及上清转移至分别的离心管中，56℃灭活后，每瓶中的细胞及上清超滤浓缩至1mL；将1瓶所述培养瓶的浓缩液于≤-70℃保存，用于qPCR检测；将另1瓶所述培养瓶的浓缩液作为下一轮感染接种液； 4将第一轮感染后获得的各1mL浓缩液加入4mL新鲜的培养基中，进行各组1瓶4至5mL容量的细胞培养瓶中细胞的第二轮感染，与步骤3同样地，各培养瓶获得1mL超滤浓缩液，全部用于下一轮感染； 5第三轮感染、第四轮感染和四轮以上感染与第二轮感染操作相同；在四轮或四轮以上感染结束后，各培养瓶获得1mL超滤浓缩液全部用于qPCR检测； 6完成四轮或四轮以上感染后，自第一轮和最后一轮感染收获的超滤浓缩液提取DNA，作为实施qPCR的DNA模板，以Rep基因为模板设计特异性引物以及Taqman探针，进行qPCR检测； 7结果分析及判定： 如果阳性对照组:第一轮Ct均值＞最后一轮Ct均值； 加标组：第一轮Ct均值＞最后一轮Ct均值； 且受检样品组：第一轮Ct均值＜最后一轮Ct均值，则受检样品中rcAAV9含量为：＜rcAAV9标准品加入量rAAV9样品加入量； 如果阳性对照组:第一轮Ct均值＞最后一轮Ct均值； 加标组：第一轮Ct均值＞最后一轮Ct均值； 且受检样品组：第一轮Ct均值＞最后一轮Ct均值，则需进一步稀释受检样品并实施步骤1至6的检测，直至检测到受检样品组：第一轮Ct均值＜最后一轮Ct均值，则受检样品中rcAAV9含量为：rcAAV9标准品以vg表示的加入量稀释的rAAV9样品以vg表示的加入量， 其中，所述细胞培养瓶是T25细胞培养瓶，所述培养基是包含10％胎牛血清的DMEM培养基，且使用辅助病毒以MOI=2.5感染细胞，所述辅助病毒是腺病毒。

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