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龙图腾网获悉郑州大学申请的专利一种pH驱动聚集死亡受体5联合酶级联的DNA纳米弹簧的制备方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116747313B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-31发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310440653.0，技术领域涉及：A61K47/54；该发明授权一种pH驱动聚集死亡受体5联合酶级联的DNA纳米弹簧的制备方法及应用是由张开翔;王丹钰;段捷;高华;史进进;刘军杰;张振中设计研发完成，并于2023-04-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种pH驱动聚集死亡受体5联合酶级联的DNA纳米弹簧的制备方法及应用在说明书摘要公布了：本发明涉及pH驱动聚集死亡受体5联合酶级联的DNA纳米弹簧的制备方法及应用，可有效解决现有技术不能响应pH聚集DR5同时促进DR5表达的问题，其解决的技术方案是，该DNA纳米弹簧包含DR5TP、葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶；将不同DNA链进行退火杂交和T4DNA连接酶连接，合成编码有i‑motif的DNA纳米弹簧，通过生物素‑链霉亲和素相互结合作用修饰DR5TP、GOX和HRP，得到pH响应聚集死亡受体5联合酶级联的DNA纳米弹簧，本发明基于pH响应核酸自递送策略，通过调控配体间距诱导肿瘤细胞凋亡信号激活，通过响应肿瘤微酸环境收缩，实现DR5受体的有效激活，并且巧妙联合酶级联反应促进细胞凋亡，是DNA纳米材料上的创新。

本发明授权一种pH驱动聚集死亡受体5联合酶级联的DNA纳米弹簧的制备方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种pH驱动聚集死亡受体5联合酶级联的DNA纳米弹簧的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1成环反应 5’磷酸化的线性DNA链L1和连接primer按照比例1：4分别加入到4μL10×T4DNAligasebuffer和体积0μL~36μL的超纯水混合溶液中，用移液枪吹打混匀，95℃加热5min使DNA链变性，然后25℃孵育1h使L1与连接primer杂交，然后向混合溶液中加入2μLT4DNAligase，25℃下孵育3h，成环反应结束后，向混合溶液中分别加入1μLExoI和ExoIII，经过37℃40min孵育以剪切primer，然后80℃20min以灭活酶，得到单独的C1环； 2合成DNA纳米弹簧混合溶液 将步骤1得到的C1环、5’磷酸化的线性DNA链L2、5’磷酸化的线性DNA链L3按照比例1：4：4、1：10：10和1：20：20分别加入到4μL10×T4DNAligasebuffer和体积0μL~36μL的超纯水混合溶液中，用移液枪吹打混匀，90℃加热10min然后冷却到50℃孵育30min，然后混合溶液快速降温到25℃，加入2μLT4DNAligase，25℃孵育1h，然后65℃加热10min以灭活酶，得合成DNA纳米弹簧混合溶液； 3添加互补序列 将与i-motif互补的DNA序列cDNA95℃加热5min，然后快速加入到合成DNA纳米弹簧混合溶液中，使其终浓度是4μM，得合成编码有i-motif的DNA纳米弹簧； 4连接DR5TP DR5TP-biotin和链霉亲和素按照2：1的比例分别加到体积0μL~100μL的PBS缓冲液中，移液枪吹打混匀后室温下孵育30min，然后按照链霉亲和素和步骤3得到的合成编码有i-motif的DNA纳米弹簧1：1的比例混合后室温下孵育30min，编码有i-motif的DNA纳米弹簧即可成功连接DR5TP，得合成修饰有DR5TP的DNA纳米弹簧； 5修饰GOX和HRP GOX-biotin、HRP-biotin分别和链霉亲和素按照2：1的比例分别加到体积0μL~100μL的PBS缓冲液中，移液枪吹打混匀后室温下孵育30min，然后按照GOX-链霉亲和素和DNA短链11：1的比例混合后室温下孵育30min；HRP-链霉亲和素和DNA短链21：1的比例混合后室温下孵育30min，即可得到连接酶的核酸链GOX-DNAS1、HRP-DNAS2，最后，将GOX-DNAS1和HRP-DNAS2共同加到步骤4得到的修饰有DR5TP的DNA纳米弹簧溶液中，37℃孵育1h，酶通过核酸杂交连接到C1，即得终产物DNA纳米弹簧； 所述的步骤1中，线性DNA链L1序列为：TATACAGACGTTTTTTTTTTTTTTTCGATTATGACCAGTCTCACATTTTTTTTTTTTTTTCGATCCTGAC，如SEQIDNO:1所示； 所述的步骤1中，连接primer序列为：TCTGTATAGTCAGGAT，如SEQIDNO:2所示； 所述的步骤1中，10×T4DNAligasebuffer包含50mMTris-HCl,10mMMgCl2,10mMDTTand1mMATP； 所述的步骤2中，线性DNA链L2序列为：GTCATAATCGTTTTTCCCCCCCCTTTCCCCCCCCTTTTTCGTCTGTATAGTCAGGATCGTTTTTCCCCCCCCTTTCCCCCCCCTTTTTTGTGAGACTG，如SEQIDNO:3所示； 所述的步骤2中，线性DNA链L3序列为：TATACAGACGTTTTTCCCCCCCCTTTCCCCCCCCTTTTTCGATTATGACCAGTCTCACATTTTTCCCCCCCCTTTCCCCCCCCTTTTTCGATCCTGAC，如SEQIDNO:4所示； 所述的步骤3中，cDNA序列为：GGGGGGGGAAAGGGGGGGG，如SEQIDNO:5所示； 所述的步骤5中，DNA短链1序列为：TTTTTTTTTTAAAAAAAAAACGTCTGTATA，如SEQIDNO:6所示； 所述的步骤5中，DNA短链2序列为：GTCAGGATCGAAAAAAAAAATTTTTTTTTT，如SEQIDNO:7所示。

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