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龙图腾网获悉南京工业大学申请的专利一种银耳孢子原生质体的制备与再生的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN117187080B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-31发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202311193991.5，技术领域涉及：C12N1/14；该发明授权一种银耳孢子原生质体的制备与再生的方法是由李莎;余才元;张琦;徐虹;雷鹏设计研发完成，并于2023-09-15向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种银耳孢子原生质体的制备与再生的方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种高效获得银耳孢子原生质体制备和再生的方法，该方法包括银耳孢子活化培养、种子液培养、原生质体的制备和原生质体的再生等步骤。本发明利用30mgmL复合酶解液溶壁酶与崩溃酶的质量比为4:1，稳渗剂为0.6molL氯化钾，pH为5将菌体浓度为3.6×108个mL的银耳孢子的细胞壁于26℃酶解后，在含0.8molL蔗糖和促生剂20mgLVB1+500mgL牛血清蛋白的再生培养基上复生。运用本发明方法制备的原生质体数量可达1.14×108个mL，再生率达到43.52％。本发明提供了一种高效稳定的银耳孢子原生质体制备和再生方法，操作简单，重复性高，可为后续银耳孢子的遗传转化操作提供高质量的原生质体。

本发明授权一种银耳孢子原生质体的制备与再生的方法在权利要求书中公布了：1.一种银耳孢子原生质体的制备与再生的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1银耳孢子活化培养：挑取银耳孢子菌落在PDA固体培养基上活化培养，得到活化后的银耳孢子； 2银耳孢子种子液培养：将步骤1活化后的银耳孢子接种于种子液培养基中进行发酵培养，得到银耳孢子悬液，将银耳孢子悬液离心后获得沉淀，即为银耳孢子菌体； 3银耳孢子原生质体酶解液制备：将步骤2得到的银耳孢子菌体用稳渗剂洗涤、离心去上清后，重悬于复合酶解液中进行酶解，制备得到银耳孢子原生质体酶解液； 4银耳孢子原生质体再生：将步骤3获得的银耳孢子原生质体酶解液离心去上清分离出原生质体，用稳渗剂洗涤并稀释制成原生质体悬浮液，将原生质体悬浮液涂布于再生培养基上培养形成再生菌落； 其中，步骤3中，所述的复合酶解液包括溶壁酶、崩溃酶和稳渗剂，其总酶浓度为10~30mgmL，pH=5~8； 其中，步骤4中，所述的再生培养基，其配方为：麦芽糖5~20gL、葡萄糖1~10gL、酵母粉1~5gL、蛋白胨1~5gL、KH2PO41~10gL、硫酸镁0.1~2gL、琼脂15~30gL、再生稳渗剂、促生剂，溶剂为水；具体的，所述的再生稳渗剂为0.4~1.2molL蔗糖，所述的促生剂为10~50mgLVB1+100~1000mgL牛血清蛋白； 其中，所述银耳孢子来源于保藏编号为CGMCCNo.40060，菌株号为S-41的银耳菌株； 其中，步骤3或步骤4中，所述的稳渗剂为以0.5~1.0molL磷酸钠缓冲液为溶剂配制的0.4~1.2molL氯化钾溶液，pH=5~8； 其中，步骤3中，所述重悬，其重悬后的银耳孢子的初始浓度为3.6×108个mL。

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