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龙图腾网获悉中国农业科学院植物保护研究所申请的专利基于CRISPR/Cas9编辑本氏烟基因的载体及其构建方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN111041043B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-07发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：201911411237.8，技术领域涉及：C12N15/82；该发明授权基于CRISPR/Cas9编辑本氏烟基因的载体及其构建方法和应用是由周雪平;李方方;李浩;曹步暐设计研发完成，并于2019-12-31向国家知识产权局提交的专利申请。

本基于CRISPR/Cas9编辑本氏烟基因的载体及其构建方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于CRISPRCas9编辑本氏烟基因的载体及其构建方法和应用，包括针对本氏烟UbEF1B基因构建的BKG‑g10、BKG‑g11载体和或针对本氏烟CCR4NOT基因构建的BKG‑g12、BKG‑g13载体。上述载体将UbEF1B基因或CCR4NOT基因编辑后本氏烟生长状态正常，表型相较于野生型未发生明显变化；不会对其性状产生影响，利于后代的延续。依靠CRISPRCas9系统编辑本氏烟内源基因相较于传统的育种方法能更快更有效的获得抗病材料。

本发明授权基于CRISPR/Cas9编辑本氏烟基因的载体及其构建方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种基于CRISPRCas9编辑本氏烟基因的载体在本氏烟中抵御双生病毒侵染中的应用，其特征在于：所述双生病毒为TLCYnV；所述载体为针对本氏烟UbEF1B基因构建的pCambia1300-BKG-g10和针对本氏烟CCR4NOT基因构建的pCambia1300-BKG-g12，简称分别为BKG-g10和BKG-g12； 所述载体的构建方法具体为：在本氏烟UbEF1B基因CDS区的序列中选定PAM位点并设计gRNA；包括BKG-g10载体所需的一个靶点的两条gRNA链，如SEQID：NO.1-NO.2所示；并将上述单链gRNA合成为双链； 在本氏烟CCR4NOT基因的CDS区序列中选定PAM位点并设计gRNA；包括BKG-g12载体所需的一个靶点的两条gRNA链，如SEQID：NO.5-NO.6所示；并将上述单链gRNA合成为双链； 所述BKG-g10载体的构建包括以下步骤： ①BsaI酶切BKG质粒，然后纯化回收DNA片段，-20℃冷冻保存； ②将酶切后的BKG载体与双链化的gRNA用T4DNA连接酶进行连接； ③将连接产物转化DH5α大肠杆菌，卡那霉素筛选，挑选单克隆做菌落PCR鉴定并测序，确认靶点是否连入载体；鉴定引物如SEQID:NO.9、NO.2所示； ④提取质粒，并用如SEQID:NO.9-NO.10所示的引物测序，得到加g10靶点的BKG-g10载体； 所述BKG-g12载体的构建包括以下步骤： ①BsaI酶切BKG质粒，然后纯化回收DNA片段，-20℃冷冻保存； ②将酶切后的BKG载体与双链化的gRNA用T4DNA连接酶进行连接； ③将连接产物转化DH5α大肠杆菌，卡那霉素筛选，挑选单克隆做菌落PCR鉴定并测序，确认靶点是否连入载体,鉴定引物如SEQID:NO.9、NO.6所示； ④提取质粒，并用如SEQID:NO.9-NO.10所示的引物测序，得到加g12靶点的BKG-g12载体。

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