首都医科大学附属北京天坛医院;北京和合医学诊断技术股份有限公司王玉飞获国家专利权
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龙图腾网获悉首都医科大学附属北京天坛医院;北京和合医学诊断技术股份有限公司申请的专利液相色谱串联质谱法检测多种氨基酸、激素和神经酰胺的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117030898B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-07发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311078247.0,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权液相色谱串联质谱法检测多种氨基酸、激素和神经酰胺的方法是由王玉飞;贾永娟;张国军;倪君君;韩冰清;姜文灿;赵金宝;任晓航设计研发完成,并于2023-08-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本液相色谱串联质谱法检测多种氨基酸、激素和神经酰胺的方法在说明书摘要公布了:本发明涉及检测技术领域,尤其涉及一种液相色谱串联质谱法联合检测血液及脑脊液中多种氨基酸、激素和神经酰胺的方法。具体包括:分别制备得到标准曲线方程I和标准曲线方程II,对待测样本进行前处理,分别获得用于检测氨基酸和激素的进样样本I和用于检测神经酰胺的进样样本II;使用高效液相色谱质谱联用仪分别进行检测,将进样样本I的检测结果代入标准曲线方程I,将进样样本II的检测结果代入标准曲线方程II,得到待测样本中多种氨基酸、激素和神经酰胺的含量。本发明可通过一次采集血液和脑脊液,实现7种氨基酸、11种激素和3种神经酰胺三大类物质的联合检测。本发明的检测方法大大节省了分析时间,降低了分析成本。
本发明授权液相色谱串联质谱法检测多种氨基酸、激素和神经酰胺的方法在权利要求书中公布了:1.一种液相色谱串联质谱法联合检测多种氨基酸、激素和神经酰胺的方法,其特征在于, 所述氨基酸包括异亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、犬尿氨酸;所述激素包括孕酮、孕烯醇酮、二氢孕酮、四氢孕酮、别孕烯醇酮、睾酮、脱氢表雄酮、雄烷二醇3α,17β、二氢睾酮、雌三醇和雌二醇;所述神经酰胺包括:神经酰胺C16d18:116:0、神经酰胺C18d18:118:0和神经酰胺C24d18:124:0; 所述方法至少包括以下步骤: S1、分别制备得到标准曲线方程I和标准曲线方程II, 配制标准溶液I,使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标准溶液I进行检测,获得用于计算激素和氨基酸含量的标准曲线方程I; 配制标准溶液II,使用高效液相色谱质谱联用仪分别对所述标准溶液II进行检测,获得用于计算神经酰胺含量的标准曲线方程II; S2、待测样本的前处理,包括: 将所述待测样本分为3份:待测样本a、待测样本b和待测样本c;所述待测样本为血清样本或脑脊液样本; 取混合氨基酸内标工作液和所述待测样本a,加入蛋白沉淀剂A混匀后离心,取上清液I,加入水稀释得到溶液I; 取混合激素内标工作液和所述待测样本b混匀,加入蛋白沉淀剂A混匀后离心,取上清液II加入水复溶,进行固相萃取,收集含激素成分的洗脱液,干燥后与所述溶液I混合,离心后的上清作为进样样本I,用于进样分析;所述固相萃取采用负载有OasisPRiME前处理小柱的SPE板;所述固相萃取的洗脱液采用乙腈,并在收集洗脱液前依次用水、体积百分比为20%~40%的甲醇水溶液、体积百分比为5%~15%的乙腈水溶液进行淋洗; 取混合神经酰胺内标工作液和所述待测样本c,加入蛋白沉淀剂B混匀后离心,取上清液为进样样本II; 所述蛋白沉淀剂A选自甲醇;所述蛋白沉淀剂B选自甲醇和异丙醇体积比为1.5~2.5:1的混合溶剂; S3、分别检测所述进样样本I和所述进样样本II,包括: 使用高效液相色谱质谱联用仪分别对所述进样样本I和所述进样样本II进行检测,将进样样本I的检测结果代入所述标准曲线方程I,将进样样本II的检测结果代入所述标准曲线方程II,得到所述待测样本中多种氨基酸、激素和神经酰胺的含量; 其中,使用高效液相色谱质谱联用仪分析时色谱柱采用五氟苯基色谱柱, 使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标准溶液I和所述进样样本I进行检测时,色谱分析条件包括: 流动相:A相:含0.4~0.5mmolL氟化铵的水;B相:甲醇; 梯度洗脱条件: 0.00~1.00min,A相采用浓度A1,B相采用浓度B1; 1.01~3.00min,A相采用浓度A2,B相采用浓度B2; 3.00~3.50min,A相由浓度A2匀速变化至浓度A3,B相:由浓度B2匀速变化至浓度B3; 3.50~12.00min,由浓度A3匀速变化至浓度A4,B相:由浓度B3匀速变化至浓度B4; 12.01~12.50min,由浓度A4匀速变化至浓度0,B相:由浓度B4匀速变化至100%; 12.50~13.00min,A相为0%;B相为100%; 13.01~15.00min,A相采用浓度A1,B相采用浓度B1; 浓度A1选自95%~90%,浓度B1选自5%~10%,浓度A1+浓度B1=100%; 浓度A2选自85%~75%,浓度B2选自15%~25%,浓度A2+浓度B2=100%; 浓度A3选自60%~65%,浓度B3选自35%~40%,浓度A3+浓度B3=100%; 浓度A4选自10%~20%,浓度B4选自80%~90%,浓度A4+浓度B4=100%; 使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标准溶液II、所述进样样本II进行检测时的色谱分析条件包括: 流动相:A相:含有体积百分比为0.1%~0.2%甲酸和1~2mmolL乙酸铵的水溶液;B相:体积比为1.5~2.5:1的甲醇和异丙醇混合溶剂; 梯度洗脱条件: 0.00~1.50min,A相采用浓度A1,B相采用浓度B1; 1.50~2.00min,A相由浓度A1匀速变化至浓度A2,B相:由浓度B1匀速变化至浓度B2; 2.00~6.00min,A相采用浓度A2,B相采用浓度B2; 6.01~7.50min,A相采用浓度A1,B相采用浓度B1; 浓度A1选自15%~20%,浓度B1选自80%~85%,浓度A1+浓度B1=100%; 浓度A2选自0~5%,浓度B2选自95%~100%,浓度A2+浓度B2=100%。
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