安徽大学姚动邦获国家专利权
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龙图腾网获悉安徽大学申请的专利一种灰盖鬼伞菌来源的漆酶及其重组表达菌株和高效表达方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119552836B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-07发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411662540.6,技术领域涉及:C12N9/02;该发明授权一种灰盖鬼伞菌来源的漆酶及其重组表达菌株和高效表达方法是由姚动邦;刘小壮;肖亚中;张学成;方泽民设计研发完成,并于2024-11-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种灰盖鬼伞菌来源的漆酶及其重组表达菌株和高效表达方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种灰盖鬼伞菌来源的漆酶及其重组表达菌株和高效表达方法,属于微生物学和生物工程技术领域。本发明以黑曲霉MA70.15为实验菌株,采用随机整合策略,使得pC3‑PcitA‑SPGlaA‑lcc9‑TtrpC‑pyrG表达载体以连续九个拷贝的形式整合在了宿主菌柠檬酸合酶的启动子上游区域。本发明为了探究发酵培养基中微粒及渗透调节剂对重组黑曲霉发酵产漆酶的影响,添加了不同种类及浓度的微粒和渗透调节剂,使得重组菌AnRcgL1的摇瓶发酵漆酶酶活达到1566.7UL,1L发酵罐发酵酶活达到1961UL,成功实现了漆酶Lcc9在黑曲霉中的重组高效表达。
本发明授权一种灰盖鬼伞菌来源的漆酶及其重组表达菌株和高效表达方法在权利要求书中公布了:1.黑曲霉重组菌株AnRcgL1在高效制备灰盖鬼伞菌来源的漆酶Lcc9中的应用,其特征在于包括如下步骤: 步骤1:将黑曲霉重组菌株AnRcgL1涂布于PDA固体平板上,培养3~5天后,加入含0.05%吐温80的生理盐水溶液,刮取孢子,制备成孢子悬液; 步骤2:将新鲜孢子悬液接种至发酵培养基中,于30℃、200rpm培养5-7天,获得漆酶Lcc9;所述发酵培养基中包括1%-2%的CaCO3; 所述黑曲霉重组菌株AnRcgL1是以黑曲霉MA70.15为表达宿主,以pC3-PcitA-SPGlaA-lcc9-TtrpC-pyrG为表达载体,通过随机整合构建获得;其中启动子PcitA序列如SEQIDNO.3所示,信号肽SPGlaA序列如SEQIDNO.4所示; 将所述表达载体pC3-PcitA-SPGlaA-lcc9-TtrpC-pyrG转化至黑曲霉原生质体,转化方法为基于聚乙二醇介导原生质体的转化,包括将原生质体悬液、表达载体与PEG缓冲溶液混合冰浴后,再加入PEG缓冲溶液、渗透压稳定剂和软琼脂培养基,混合后转移至再生培养基,再生得到转化株,挑取转化株至筛选平板进行筛选获得。
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