武汉亚非种业有限公司贺亚菲获国家专利权
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龙图腾网获悉武汉亚非种业有限公司申请的专利一种用于皱叶菜的开放式组培方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121400358B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-07发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511970891.8,技术领域涉及:A01H4/00;该发明授权一种用于皱叶菜的开放式组培方法是由贺亚菲;贺胜利;姚少林;樊涛;廖建桥;姚志新设计研发完成,并于2025-12-25向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于皱叶菜的开放式组培方法在说明书摘要公布了:本申请提供了一种用于皱叶菜的开放式组培方法,该方法包括以下步骤:S1:将皱叶菜外植体进行消毒处理,得到预处理外植体;S2:将预处理外植体插入第一改性MS培养基中进行第一阶段培养,得到第一阶段外植体;S3:将第一阶段外植体转移至第二改性MS培养基中进行第二阶段培养,得到第二阶段外植体;S4:将第二阶段外植体转移至第三改性MS培养基中进行第三阶段培养,得到初生苗。通过在三阶段改性MS培养基中依次递减添加无细胞发酵滤液与PPM,实现了在开放环境下对皱叶菜外植体的高效培养,降低了污染率和褐化程度,同时促进了外植体的愈合、不定芽分化以及根原基形成,提高了皱叶菜开放式组培的成苗率。
本发明授权一种用于皱叶菜的开放式组培方法在权利要求书中公布了:1.一种用于皱叶菜的开放式组培方法,其特征在于,包括以下步骤: S1:将皱叶菜外植体进行消毒处理,得到预处理外植体; S2:将预处理外植体插入第一改性MS培养基中进行第一阶段培养,使外植体切口愈合,得到第一阶段外植体; S3:将第一阶段外植体转移至第二改性MS培养基中进行第二阶段培养,使外植体分化形成不定芽,得到第二阶段外植体; S4:将第二阶段外植体转移至第三改性MS培养基中进行第三阶段培养,使外植体诱导形成根原基,得到初生苗; 其中,所述第一改性MS培养基通过以下方法得到: 按1~2mgL6-苄氨基嘌呤、0.4~0.6mgL萘乙酸、0.1~0.3mgL噻苯脲、40~60mLL无细胞芽孢杆菌发酵滤液、0.04%~0.06%PPM加入MS培养基中,得到第一改性MS培养基; 所述第二改性MS培养基通过以下方法得到: 按1~2mgL6-苄氨基嘌呤、0.4~0.6mgL萘乙酸、0.1~0.3mgL噻苯脲、15~25mLL无细胞芽孢杆菌发酵滤液、0.01%~0.03%PPM加入MS培养基中,得到第二改性MS培养基; 所述第三改性MS培养基通过以下方法得到: 按1~2mgL6-苄氨基嘌呤、0.4~0.6mgL萘乙酸、0.1~0.3mgL噻苯脲、5~14mLL无细胞芽孢杆菌发酵滤液、0~0.002%PPM加入MS培养基中,得到第三改性MS培养基; 所述无细胞发酵滤液包括无细胞芽孢杆菌发酵滤液和无细胞木霉发酵滤液;所述无细胞发酵滤液中无细胞芽孢杆菌发酵滤液和无细胞木霉发酵滤液的体积比为1.5~2.5:1; 所述无细胞芽孢杆菌发酵滤液通过以下方法制备得到: 以106~107CFUmL接种量将芽孢杆菌接种于LB液体培养基中,在25~35℃下有氧发酵36~60h,过滤去除菌体得到无细胞芽孢杆菌发酵滤液;所述芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,所述枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的接种量之比为1:0.5~1.5; 所述无细胞木霉发酵滤液通过以下方法制备得到: 以105~106个孢子mL接种量将木霉孢子接种于PDB培养基中,在25~35℃下有氧发酵60~84h,过滤去除菌丝和菌体得到无细胞木霉发酵滤液;所述木霉包括哈茨木霉。
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