浙江觅得优生物科技有限公司潘如雪获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江觅得优生物科技有限公司申请的专利一种以烟草BY-2细胞为底盘生物合成人参皂苷的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120924600B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-10发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511454424.X,技术领域涉及:C12N15/84;该发明授权一种以烟草BY-2细胞为底盘生物合成人参皂苷的方法是由潘如雪;杨靖宇;曾设民;姚睿;袁博潇;张梦南设计研发完成,并于2025-10-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种以烟草BY-2细胞为底盘生物合成人参皂苷的方法在说明书摘要公布了:本申请公开了一种以烟草BY‑2细胞为底盘生物合成人参皂苷的方法,属于生物工程技术领域。该方法包括以下步骤:首先,构建含有人参皂苷合成通路关键基因集的重组表达载体,所述基因集包括来源于人参的tHMGR、SE、SS等基因及来源于三七的Pn1‑31、Pn3‑31基因;其次,将重组载体导入烟草BY‑2细胞,通过固体培养基筛选获得纯系阳性细胞系;最后,将阳性细胞系在液体或固体培养基中培养,获得人参皂苷Rh2和或Rg3。本发明利用烟草BY‑2细胞生长快、培养稳定的优势,成功重构了稀有人参皂苷合成通路,实现了稀有人参皂苷的高效异源合成,为其工业化生产提供了可重复的技术方案。
本发明授权一种以烟草BY-2细胞为底盘生物合成人参皂苷的方法在权利要求书中公布了:1.一种以烟草BY-2细胞为底盘生物合成人参皂苷的方法,其特征在于,包括以下步骤: 1构建重组表达载体:将人参皂苷合成通路关键基因集导入载体pYLTAC380GW,获得重组表达载体pYLTAC380GW-tHMGR-SE-SS-PgPPDs-PgDDS-Pn1-31-Pn3-31-FPS-IDI;所述的人参皂苷合成通路关键基因集包括来源于人参的截断型3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因tHMGR、人参角鲨烯环氧酶基因SE、人参角鲨烯合酶基因SS、人参达马烯二醇合酶基因PgDDS、人参细胞色素P450基因PgPPDs、黄花蒿法尼基焦磷酸合酶基因FPS、拟南芥异戊烯基焦磷酸异构酶基因IDI,以及来源于三七的基因Pn1-31和Pn3-31; 2转化烟草BY-2细胞:将步骤1所述重组表达载体导入烟草BY-2细胞,加入侵染液,暗培养,收集细胞;侵染液与BY-2细胞的体积比例为3:50,离心收集条件为180g离心2分钟;所述的侵染液为:10mMMES,10mMMgCl2,115℃20分钟高温高压灭菌,冷却后加入150μMAS; 3阳性细胞系筛选; 4人参皂苷合成培养:将阳性细胞系接种至烟草BY-2细胞液体或固体培养基中培养,收集培养物获得人参皂苷;所述液体培养条件为25℃、130rpm摇床培养7-14天,所述固体培养条件为25℃暗培养14天; 所述的烟草BY-2细胞液体培养基:MSSalt4.4gL,蔗糖30gL,磷酸二氢钾0.255gL,调节pH至5.0,115℃高压灭菌20分钟,冷却至65℃后添加1000×无菌激素母液,所述激素母液含0.2mgmL2,4-D、1mgmL硫胺素、100mgmL肌醇; 烟草BY-2细胞固体培养基:MSSalt4.4gL,蔗糖30gL,磷酸二氢钾0.255gL,调节pH至5.8,加入7gL植物凝胶,115℃高压灭菌20分钟,冷却至65℃后添加1000×无菌激素母液,所述激素母液含0.2mgmL2,4-D、1mgmL硫胺素、100mgmL肌醇;所述的固体培养基中还含有50mgL潮霉素和200mgL特美汀。
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