南京有为生物技术有限公司许仁杰获国家专利权
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龙图腾网获悉南京有为生物技术有限公司申请的专利一种重组菌株生产脱氧胸苷三磷酸的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116287066B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211727940.1,技术领域涉及:C12N15/70;该发明授权一种重组菌株生产脱氧胸苷三磷酸的方法是由许仁杰;彭琳;张思设计研发完成,并于2022-12-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种重组菌株生产脱氧胸苷三磷酸的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种重组菌株生产脱氧胸苷三磷酸的方法,包括以下步骤:步骤1:利用CRISPRCas9介导的基因编辑方法对大肠杆菌基因组进行定向改造,定向改造包括以下内容:a.敲除核苷三磷酸焦磷酸酶基因mazGyhdE,阻断dTTP降解为dTMP的路径;b.敲除核苷酸核苷酶基因ppnN,阻断dTMP降解为胸腺嘧啶的路径;c.敲除核苷酸酶基因yfbRyfdRushAumpHumpGyjjG,阻断dTMP降解为dT的路径。本发明提供一种重组菌株生产脱氧胸苷三磷酸的方法,该方法的转化率达到80%~90%,经离子交换层析纯化后,纯度可达99%以上。
本发明授权一种重组菌株生产脱氧胸苷三磷酸的方法在权利要求书中公布了:1.一种重组菌株生产脱氧胸苷三磷酸的方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤1:利用CRISPRCas9介导的基因编辑方法对大肠杆菌基因组进行定向改造,定向改造包括以下内容:a.敲除两种核苷三磷酸焦磷酸酶基因mazG和yhdE,阻断dTTP降解为dTMP的路径;b.敲除核苷酸核苷酶基因ppnN,阻断dTMP降解为胸腺嘧啶的路径;c.敲除六种核苷酸酶基因yfbR、yfdR、ushA、umpH、umpG和yjjG,阻断dTMP降解为dT的路径;d.在假基因位点mbhA整合大肠杆菌内源的胸苷激酶基因tdk,强化dT的磷酸化路径;e.在假基因位点yeeP整合大肠杆菌内源的dTMP激酶基因tmk,强化dTMP的磷酸化路径;所述胸苷激酶基因tdk的基因序列为:SEQIDNO.1,所述dTMP激酶基因tmk的基因序列为:SEQIDNO.2; 步骤2:以脱氧胸苷为起始底物,采用基因改造后的大肠杆菌发酵生产脱氧胸苷三磷酸。
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