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龙图腾网获悉重庆医科大学申请的专利槲皮素经SCAP/SREBP2/NLRP3通路减轻脂多糖急性肺损伤的动物模型研究方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116626303B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310257913.0，技术领域涉及：G01N33/68；该发明授权槲皮素经SCAP/SREBP2/NLRP3通路减轻脂多糖急性肺损伤的动物模型研究方法是由敬和昆;王导新设计研发完成，并于2023-03-17向国家知识产权局提交的专利申请。

本槲皮素经SCAP/SREBP2/NLRP3通路减轻脂多糖急性肺损伤的动物模型研究方法在说明书摘要公布了：本发明属于生物技术技术领域，具体的说是槲皮素经SCAPSREBP2NLRP3通路减轻脂多糖急性肺损伤的动物模型研究方法，包括影响研究方法如下所示：S1：实验动物分组与处理；S2：细胞培养及其分组；S3：实验动物肺湿干比WD评估肺水肿及其支气管肺泡灌洗液bronchoalveolarlavagefluid，BALF收集；S4：实验动物肺组织病理学观察；S5：ELISA法检测肿瘤坏死因子‑αTNF‑α、白细胞介素‑6IL‑6和白细胞介素‑1βIL‑1β水平；S6：Westernblot检测通路蛋白；S7：qPCR检测相关核酸表达；S8：流式细胞术检测细胞死亡率与统计学处理使用GraphPadPrism9.0软件统计分析；本发明以通过实验方法表达槲皮素在小鼠急性肺损伤中的作用及对SCAPSREBP2NLRP3通路介导的炎症反应调节影响，为ARDS的治疗提供理论依据。

本发明授权槲皮素经SCAP/SREBP2/NLRP3通路减轻脂多糖急性肺损伤的动物模型研究方法在权利要求书中公布了：1.槲皮素经SCAPSREBP2NLRP3通路减轻脂多糖急性肺损伤的动物模型研究方法，其特征在于，所述研究方法如下所示： S1：实验动物分组与处理： A1：将40只雄性C57BL6小鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+QUE组和QUE组，每组10只，其中LPS为脂多糖，QUE为槲皮素； A2：获取已被分别腹腔注射100mgkg的槲皮素溶液的LPS+QUE组和QUE组小鼠，和已被注射等量PBS缓冲液对照组的小鼠； A3：1h后，获取已使用50mgkg戊巴比妥麻醉的四组小鼠，再获取已被气管插管滴注5mgkg、总体积100μl的LPS的LPS组和LPS+QUE组的小鼠，获取按照以上操作滴注同等体积的无菌PBS缓冲液的对照组和QUE组的小鼠； A4：滴注后竖立小鼠2-3min使溶液在肺部充分沉淀，于造模24h后获取已处死小鼠，收集标本进行检测； S2：细胞培养及其分组： B1：将HUVECs细胞用含10%胎牛血清和1%青霉素链霉素的1640培养基在37°C、5%CO2细胞培养箱中培养，其中HUVECs细胞是指人脐静脉内皮细胞； B2：将细胞分为4组：对照组、LPS组、LPS+QUE组和QUE组，其中LPS+QUE组和QUE组先用槲皮素处理1h，槲皮素浓度为30mmolL，然后LPS组和LPS+QUE组用LPS处理24h，LPS浓度为1μgml，最后收集以上四组细胞进行进一步实验； S3：实验动物肺湿干比WD评估肺水肿及其支气管肺泡灌洗液BALF收集： 取S1中的四组小鼠处死后左肺组织，将之置于事先称重的锡箔纸上称量肺湿重，后再将样本置于80℃烤箱48h至恒重后，称量其干重，通过WD计算肺组织的干湿比；所述S3中支气管肺泡灌洗液BALF收集：获取S1中已麻醉后的气管插管的四组小鼠，用1mLPBS缓冲液冲洗肺部3-5次以收集BALF，让获取的BALF以1500rpm在4℃条件下离心15min后取上清液，收集的上清液储存在-80℃冰箱备用； S4：实验动物肺组织病理学观察： C1：取小鼠右肺，浸入4%多聚甲醛中24h； C2：然后用不同浓度的乙醇溶液对标本脱水处理，石蜡包埋，切成5-7μm厚的切片，接着二甲苯脱蜡，苏木精伊红染色； C3：染色完成后，脱水封片，然后镜下观察小鼠肺组织形态； S5：ELISA法检测肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和白细胞介素-1β水平： 按照ELISA试剂盒说明书操作，测定S3中各组小鼠BALF和细胞培养基中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平； S6：Westernblot检测通路蛋白： D1：取小鼠肺组织和HUVECs细胞，使用含有PMSF的RIPA缓冲液从肺组织和HUVECs细胞中提取蛋白质，并使用BCA试剂盒测定蛋白质浓度； D2：定量后加入上样缓冲液，在沸水中变性10min，-20℃储存备用； D3：配制10%SDS-PAGE凝胶，每孔加入50μg蛋白样品，电泳后转膜至PVDF膜，用含5%脱脂奶粉的TBST封闭1h，加入相应的一抗4℃孵育过夜；TBST缓冲液洗膜3次，加入二抗37℃孵育1h，TBST缓冲液洗膜3次，超敏发光液显影曝光，用ImageJ软件系统对蛋白条带灰度值进行分析； S7：qPCR检测相关核酸表达： E1：取小鼠肺组织和HUVECs，加入RNAiso充分混匀，经异丙醇沉淀、75%乙醇洗涤后，用DEPC水溶解，用核酸分析仪检测其浓度，将RNA逆转录为cDNA； E2：引物序列：SCAP上游5'-GCATCACAGCCCTTGTCTTC-3' 下游5'-CACTGTGTTGCTGCTGCTGTA-3'；SREBP2上游 5'-GTCGATCAAGTCAGCAGCCAAG-3'下游5'-TTGGCCTGAGGTTTCACCAAG-3'；NLRP3上游 5'-TACGGCCGTCTACGTCTTCT-3'下游 5'-CGCAGATCACACTCCTCAAA-3'；GAPDH上游 5'-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3'下游 5'-TTGCTGTTGAAGTCGCAGGAG-3'； S8：流式细胞术检测细胞死亡率与统计学处理使用GraphPadPrism9.0软件统计分析： 流式细胞术检测细胞死亡率采用AnnexinV-FITCPE凋亡检测试剂盒测定细胞死亡率，将HUVECs细胞重悬于500µl的结合缓冲液再用FITC标记的AnnexinV和PE在室温避光孵育15-20min，用流式细胞仪测定细胞死亡率；统计学处理使用GraphPadPrism9.0软件统计分析，计量资料以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用LSD-t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

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