青岛海关技术中心;临沂科技职业学院季蕾获国家专利权
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龙图腾网获悉青岛海关技术中心;临沂科技职业学院申请的专利一种用于风信子黄腐病菌检测的电化学生物传感器获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN117191905B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-14发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202311065694.2,技术领域涉及:C12Q1/04;该发明授权一种用于风信子黄腐病菌检测的电化学生物传感器是由季蕾;邵秀玲;王英超;厉艳;杨斌;齐振华;孙铮;张晓雷;宋涛设计研发完成,并于2023-08-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于风信子黄腐病菌检测的电化学生物传感器在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于特定核酸适体片段与葡萄糖氧化酶的电化学生物传感器。利用双核酸适体对同一目标物的特异性识别作用,将其修饰的金属有机骨架化合物和磁性纳米粒子与目标物结合形成自组装结构,且利用磁性纳米粒子所具有的磁性将其分离出来;同时利用葡萄糖氧化酶对葡萄糖的特异性催化作用产生过氧化氢来进一步氧化3,3’‑二氨基联苯胺使其产生电化学信号,且金属有机骨架化合物和磁性纳米粒子均具有类过氧化物酶活性,可进一步协同催化过氧化氢对3,3’‑二氨基联苯胺的氧化作用,提高其灵敏度。由此,基于不同浓度病菌溶液与对应电化学信号强度之间拟合的线性关系,该电化学生物传感器实现了对风信子黄腐病菌的高灵敏检测。
本发明授权一种用于风信子黄腐病菌检测的电化学生物传感器在权利要求书中公布了:1.一种用于风信子黄腐病菌检测的电化学生物传感器,其特征在于,该电化学生物传感器是基于特定核酸适体片段和葡萄糖氧化酶GOx构建的,由生物探针、丝网印刷碳电极和便携式电化学工作站三部分组成; 生物探针主要包括金属有机骨架化合物MIL-88-NH2材料、磁性纳米粒子MNPs和分别连接在MIL-88-NH2或MNPs表面的探针本体; 探针本体为对目标检测物具有特异性识别功能的两条特定核酸适体片段,即Xh-Apt-14和Xh-Apt-1;其中,Xh-Apt-1序列为5’-CACGCATAACACCACGCAACAGGGCTCTCATCTGTGACACAACGACGGAGTTATGCGTG-3’;而Xh-Apt-14序列为5’-CACACGCATAACTCTAGTCACAGGAAGACAAACCGGGGGGCCCACGCTGAGTTATGCGTG-3’;Xh-Apt-1和Xh-Apt-14核酸适体片段均采用5’-端氨基化处理,且其核酸适体片段的序列均为自主筛选,具有高亲和力,均能实现对目标检测物风信子黄腐病菌的特异性识别; 生物探针包括探针A和探针B;其中,Xh-Apt-14与MIL-88-NH2和葡萄糖氧化酶GOx共同组成探针A,而Xh-Apt-1与MNPs共同组成探针B; 探针A主要制备步骤如下:先将MIL-88-NH2与戊二醛混合后反应,然后经真空干燥得到醛基化MIL-88-CHO,再将MIL-88-CHO与核酸适体片段Xh-Apt-14和GOx混合后反应,反应产物通过离心处理和采用磷酸盐水缓冲液洗涤,得到MIL-88GOxXh-Apt-14复合材料;其中,MIL-88-NH2与戊二醛反应的条件为在室温下反应1~3小时;Xh-Apt-14与GOx反应的条件为在30~45℃下反应6~18小时,反应产物在7000~11000转分钟转速下离心7~13分钟,重复离心操作2~5次; 探针B主要制备步骤如下:将MNPs与偶联剂1-3-二甲基氨丙基-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合后反应,得到羧基活化的MNPs,将磁洗后的MNPs与核酸适体片段Xh-Apt-1混合后反应,制备得到MNPsXh-Apt-1复合材料;其中,MNPs与偶联剂反应的条件为在30~45℃下反应6~18小时,磁洗次数为2~5次; 探针A和探针B与目标检测物混合,在30~45℃下反应2~4小时,所得产物通过磁分离处理,得到自组装结构产物;该自组装结构产物具备如下特征,即生物探针与目标检测物接触后,因特异性识别作用,且不同核酸适体片段的识别位点不同,形成了目标检测物在中间,而探针A和B在两侧的自组装结构产物,通过磁分离将自组装结构产物分离出来;将此自组装结构产物与葡萄糖和3,3’-二氨基联苯胺混合均匀,得到相应的自组装结构产物混合体系; 将含有一定量目标检测物风信子黄腐病菌的自组装结构产物混合体系的上清液滴涂于丝网印刷碳电极表面,然后采用差分脉冲伏安法进行DPV检测,基于DPV峰电流强度与目标检测物浓度的对数作线性拟合的标准曲线,进而开发出用于风信子黄腐病菌高灵敏检测的电化学生物传感器。
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