中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所张续获国家专利权
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龙图腾网获悉中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所申请的专利检测尿液中氧化应激生物标志物的分析方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119510628B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411664636.6,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权检测尿液中氧化应激生物标志物的分析方法是由张续;朱英;林潇;杨艳伟;胡小键;冯壮壮;张海婧;于钏钏设计研发完成,并于2024-11-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本检测尿液中氧化应激生物标志物的分析方法在说明书摘要公布了:本发明涉及环境化学和生物样本分析领域,具体涉及一种检测尿液中氧化应激生物标志物的分析方法。本发明基于液相色谱串联质谱法提供了一种可同时检测人尿液中双酪氨酸、8‑羟基鸟苷、8‑羟基脱氧鸟苷和4‑羟基壬烯醛巯基尿酸的分析方法,该方法通过特定的前处理实现了尿液样品的有效净化,降低了基质效应,并结合特定的液相色谱参数条件,实现了对四种氧化应激生物标志物的同时检测。该方法选择性好,灵敏度高,检测速度快,解决了目前极性和非极性组分不能同时测定的问题,所包含的氧化应激生物标志物更全面且更合理,能够更好地反映机体的氧化应激损伤情况。
本发明授权检测尿液中氧化应激生物标志物的分析方法在权利要求书中公布了:1.一种检测尿液中氧化应激生物标志物的分析方法,其特征在于,该方法能够同时检测双酪氨酸、8-羟基鸟苷、8-羟基脱氧鸟苷和4-羟基壬烯醛巯基尿酸,包括如下步骤: 1准备混合标准储备液和混合同位素内标储备液,所述混合标准储备液包括双酪氨酸、8-羟基鸟苷、8-羟基脱氧鸟苷和4-羟基壬烯醛巯基尿酸四种氧化应激生物标志物,所述混合同位素内标储备液包括双酪氨酸-13C12、8-羟基鸟苷-13C-15N2、8-羟基脱氧鸟苷-13C-15N2和4-羟基壬烯醛巯基尿酸-d3四种内标化合物; 2样品预处理:在尿液样本中加入甲酸水溶液和混合同位素内标使用液,得到稀释液,所述混合同位素内标使用液为经水稀释后的所述混合同位素内标储备液,所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.2-0.8%; 3固相萃取处理:将所述稀释液转移至活化的WaterOasisHLB固相萃取柱中,自然重力过柱后,采用体积分数为1-3%的甲醇水溶液进行第一洗脱得到包括双络氨酸的第一洗脱液,再用甲醇进行第二洗脱得到包括8羟基鸟苷、8-羟基脱氧鸟苷和4-羟基壬烯醛巯基尿酸的第二洗脱液,将所述第一洗脱液和所述第二洗脱液混合后氮吹至进样体积,得到待测样品; 4LC-MSMS检测:取所述混合标准储备液分别稀释成不同质量浓度的混合标准使用液并进行LC-MSMS检测,以及对所述待测样品进行LC-MSMS检测;以所述混合标准使用液中各氧化应激生物标志物的峰面积与所述待测样品中各对应内标化合物的峰面积之比为纵坐标,以所述混合标准使用液中各氧化应激生物标志物的质量浓度为横坐标,建立四种氧化应激生物标志物的标准曲线,所述标准曲线拟合时采用1x进行曲线加权后定量; 所述LC-MSMS检测的条件包括:采用WatersAcquityUPLCHSST3色谱柱;以体积分数为0.04-0.06%的甲酸水溶液为流动相A,以甲醇为流动相B;全针时间为12min;洗脱梯度为0-0.5min,99%A,0.5-3.5min,99%A-35%A,3.5-4min,35%A-0%A,4-8.5min,保持0%A,8.5-8.6min,0%A-99%A,8.6-12min,保持99%A;流动相流速为0.1-0.3mLmin;进样体积为6-12μL;柱温箱温度为30-50℃;样品室温度为4-12℃;离子源为电喷雾电离源;电离方式为正离子模式和负离子模式;扫描模式为多离子反应检测模式;毛细管电压为2.3-2.6kV;离子源温度为120-180℃;脱溶剂温度为400-600℃。
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