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灌云县人民医院傅怀武获国家专利权

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龙图腾网获悉灌云县人民医院申请的专利一种用于超灵敏检测脑梗死相关miRNA的双功能纳米酶SERS检测平台及制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120310896B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510470230.2,技术领域涉及:C12Q1/6883;该发明授权一种用于超灵敏检测脑梗死相关miRNA的双功能纳米酶SERS检测平台及制备方法是由傅怀武;吴卫星;高攀;丁芳芳;朱环宇;茆益处设计研发完成,并于2025-04-15向国家知识产权局提交的专利申请。

一种用于超灵敏检测脑梗死相关miRNA的双功能纳米酶SERS检测平台及制备方法在说明书摘要公布了:本发明提供一种用于超灵敏检测脑梗死相关miRNA的双功能纳米酶SERS检测平台及制备方法,涉及生物医学工程技术领域。该制备方法步骤包括:利用种子生长法合成金纳米棒AuNRs,并在产物表面生长Pt,以制备金铂纳米棒Au@PtNRs;使用种子生长法合成金纳米六角板AuNHs,通过油水界面自组装制备AuNHs阵列;将核酸适配体互补链H1通过Au‑S键修饰在步骤1得到的Au@PtNRs上。并将其结合在miR‑106a‑5p对应的核酸适配体cDNA功能化步骤2的组装AuNHs阵列上,构建SERS检测平台。目标miR‑106a‑5p能够特异性结合cDNA,导致携带H1的Au@PtNRs从AuNHs阵列表面脱离,TMB氧化减少,SERS信号显著降低。根据SERS信号强度,代入线性回归方程,实现miRNA的定量检测。

本发明授权一种用于超灵敏检测脑梗死相关miRNA的双功能纳米酶SERS检测平台及制备方法在权利要求书中公布了:1.一种用于检测脑梗死相关miRNA的双功能纳米酶SERS检测平台的制备方法,其特征在于:所述脑梗死相关miRNA为miR-106a-5p,所述制备方法包括以下步骤: 1利用种子介导法合成AuNRs,并在产物表面生长Pt,制备金铂纳米棒Au@PtNRs;步骤1的具体实现方式是: 1.1通过种子生长法合成AuNRs,将200µL氯金酸加入到20mL十六烷基三甲基溴化铵溶液中,随后加入1.2mL硼氢化钠溶液并搅拌120秒,随后,在室温下将金种子溶液静置120分钟; 1.2通过混合4mL氯金酸、4.4mL硝酸银,200mL十六烷基三甲基溴化铵和1.4mL抗坏血酸溶液来配制生长溶液; 1.3将步骤1.2中制备得到的生长溶液与2mL的金种子溶液混合并回流24小时,最后,通过在10000rpm下离心12分钟获得AuNRs; 1.4将AuNRs悬浮液与H2PtCl6溶液混合,然后向混合物中加入0.6mL抗坏血酸溶液,并在室温下回流180分钟,最后,在10000rpm下离心12分钟获得金铂纳米棒Au@PtNRs;步骤1.4中AuNRs与H2PtCl6的体积比是200:1; 2使用种子生长法合成金纳米六角板AuNHs,通过油水界面自组装方法制备AuNHs阵列;步骤2的具体实现方式是: 2.1将0.208g聚乙烯吡咯烷酮溶解在6mL温度为35℃超纯水中,并搅拌至溶液变得透明,然后,取3mL的聚乙烯吡咯烷酮溶液迅速加入到60µL氯金酸溶液中,并快速搅拌3分钟以确保两者充分混合,接下来,向混合溶液中加入96µL新鲜制备的抗坏血酸溶液,并继续搅拌30分钟,直到溶液呈现深紫色; 2.2为了确保反应完全,将混合物在室温下静置10小时,之后,在10000rpm条件下离心18分钟,并用无水乙醇和去离子水各洗涤三次,从表面去除多余的反应物,最后,将产品溶解在去离子水中以获得金纳米六角板AuNHs溶液; 2.3取步骤2.1中得到的金纳米六角板AuNHs溶液和正己烷加入烧杯中,随后加入乙醇溶液并静置180秒,在油水界面处,AuNHs自组装形成紧密排列的具有金属光泽的纳米薄膜;步骤2.3中AuNHs、正己烷和乙醇的体积比为1:2:1; 2.4使用食人鱼溶液完全去除硅片上的有机物; 2.5将步骤2.3油水界面形成的AuNHs单层膜转移到步骤2.4处理过的硅片上,并在恒温器下干燥; 3将核酸适配体互补链H1通过Au-S键修饰在步骤1得到的Au@PtNRs上,并将其结合在miR-106a-5p对应的核酸适配体cDNA功能化步骤2的组装AuNHs阵列上,构建双功能纳米酶SERS检测平台;步骤3的具体实现方式是: 3.1为了连接cDNA,将400µL的cDNA与40µL的TCEP溶液混合,并在室温下孵育30分钟以激活核酸适配体; 3.2将步骤3.1中激活的cDNA偶联于AuNHs阵列表面,并在37℃下孵育120分钟,以使cDNA完全结合到AuNHs表面,用PBS缓冲液和去离子水反复冲洗阵列,最后加入15mL的1wt%的BSA来修补颗粒表面的非特异性结合位点,以获得cDNA功能化AuNHs阵列AuNHs@cDNA; 3.3通过向步骤1制备的Au@PtNRs中加入400μL的TCEP激活的H1,在37℃下孵育2小时,最后向溶液中加入100μL的1wt%的BSA溶液,以阻断颗粒表面上的非特异性结合位点,最后以10000rpm离心10分钟以去除多余的试剂和核酸链,获得H1功能化Au@PtNRs的Au@PtNRs@H1; 3.4将步骤3.3制备的Au@PtNRs@H1滴加到步骤3.2制备的cDNA功能化AuNHs阵列表面,放置于37℃的培养箱中孵育2小时,以制备检测miR-106a-5p的双功能纳米酶SERS检测平台,其中,H1的核苷酸序列为SH-AAAAGTGCTT;cDNA的核苷酸序列为SH-CTACCTGCACTGTAAGCACTTTT。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人灌云县人民医院,其通讯地址为:222200 江苏省连云港市灌云县西环中路2号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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